[发明专利]利用荧光指纹分析的处理原料中的TSNAs定量方法、程序以及装置

说明书

使用荧光指纹信息，迅速且准确地进行烟草原料中含有的四种TSNAs的定量。准备四种TSNAs的含量已知的烟草原料(S01)，获取荧光指纹信息(S02)。根据需要对该荧光指纹信息进行预处理(S03)，制作用于根据荧光指纹信息来估计四种TSNAs的总量的估计模型(校准曲线)(S04)。在校准曲线的验证(S05)后，将其应用于未知的烟草原料并对未知的烟草原料中含有的四种TSNAs的总量进行估计(S06)。基于四种TSNAs的总量的估计值和各TSNA的已知的存在比率，估计四种TSNAs的含量(S07)。

技术领域

本发明涉及利用荧光指纹分析的处理原料中的TSNAs定量方法、程序以及装置，尤其涉及可适用于TSNAs中的微量成分的定量的定量方法、程序以及装置。

另外，TSNAs是指烟草特有亚硝胺(Tobacco-specific nitrosamines)，作为典型的TSNAs，可列举NNN(N'-亚硝基去甲烟碱)、NNK(4-(甲基亚硝氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮)、NAT(N'-亚硝基新烟草碱)、NAB(N'-亚硝基假木贼碱)这四种。

背景技术

对试样中的成分进行测量的一般的方法是利用提取液提取试样中的各种成分，并利用高效液相色谱法(HPLC-MS/MS)对其进行定量。但是，在该方法中，样品的预处理、测量需要花费劳力和时间。

作为为了对试样中的成分进行分析、定量，无需对样品进行预处理就能够进行无损分析的成分分析、定量方法，已知利用了近红外(Near-Infrared)分光分析(NIR)的分析、定量。在NIR中，使用所测量的NIR光谱进行校准曲线(calibration curve)的制作和验证，并使用所制作的校准曲线进行成分分析和定量。

此外，作为无需对样品进行预处理就能够进行无损分析的成分分析、定量方法，还已知利用了荧光指纹信息的分析、定量(例如参见专利文献1等)。在这样的荧光指纹分析中，使用所测量并获取的荧光指纹信息进行校准曲线的制作和验证，并使用所制作的校准曲线进行成分分析和定量，从这一点来看，其部分特征与NIR相同。下面，先简单地说明有关荧光指纹和荧光指纹分析的概略。

如图2所示，当一边向含有荧光物质的试验试样照射激发光一边阶段性地改变波长，并测量从试验试样发出的光(荧光)时，在将激发波长(λEx)、荧光波长(测量波长)(λEm)、荧光强度(IEx，Em)设为三个正交轴的三维空间中，描绘出对应的点。

将这些点的集合可视化后的结果，称为荧光指纹或者激发荧光矩阵(ExcitationEmission Matrix；EEM)。

对于荧光指纹，通过利用等高线形状、颜色分布等来显示各个点的荧光强度，可以将其表示为三维曲线图(参见图3)，此外，也可以将其表示为二维曲线图(参见图4)。

这种荧光指纹示出了三维的具有大量信息的试验试样固有的图案，能够用于各种鉴别、定量等。

与其它分光分析方法相比，这种荧光指纹分析具有以下优点：无需对试验试样进行荧光染色等预处理就能够进行试验试样的表征(characterization)；操作简单且还能够在短时间内进行测量；信息量多且还能够比较容易地进行定量；能够进行无损、无接触的测量；由于使用了紫外～可见光，因而装置比较便宜。

在荧光指纹的测量中，需要荧光分光光度计，其具有扫描激发波长并连续地测量各个荧光光谱的功能，市场上也销售具有这种功能的荧光分光光度计(日立高新技术公司制造的F-7000等)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开第2018-40779号公报

发明内容

发明要解决的课题