[发明专利]改进的重组凝集素蛋白制备方法

权利要求书

1.一种制备重组凝集素蛋白的方法，其特征在于，所述制备重组凝集素蛋白的方法包括：在培养物的宿主细胞中表达由重组凝集素基因编码的重组凝集素蛋白，其中表达是在细胞具有不超过160分钟倍增时间的条件下进行。

2.根据权利要求1所述的制备重组凝集素蛋白的方法，其特征在于，其中在细胞具有至少100分钟倍增时间的条件下进行表达。

3.根据权利要求1所述的制备重组凝集素蛋白的方法，其特征在于，其中在温度至少15℃且不超过22℃的温度下进行表达。

4.根据权利要求1所述的制备重组凝集素蛋白的方法，其特征在于，其中所述宿主细胞培养物的体积至少为10升。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的制备重组凝集素蛋白的方法，其特征在于，其中还包括培养宿主细胞，所述培养宿主细胞还包括：在蛋白表达之前使宿主细胞生长的生长期，以及进行蛋白表达的表达期。

6.根据权利要求5所述的制备重组凝集素蛋白的方法，其特征在于，其中所述生长期在高于进行表达期的温度下进行。

7.根据权利要求5或6所述的制备重组凝集素蛋白的方法，其特征在于，其中在至少4小时且不超过7小时的时间内将温度从生长期降至表达期。

8.根据权利要求5至7中任一项所述的制备重组凝集素蛋白的方法，其特征在于，其中通过加入浓度至少为0.1mM且不超过0.7mM的诱导剂来诱导表达期。

9.根据权利要求5至8中任一项所述的制备重组凝集素蛋白的方法，其特征在于，其中当培养物的光密度至少为25且不超过40时，通过添加诱导剂来诱导表达期。

10.根据权利要求9所述的制备重组凝集素蛋白的方法，其特征在于，其中光密度是培养物中宿主细胞群体的量度在600纳米处测量。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的制备重组凝集素蛋白的方法，其特征在于，其中用于表达重组凝集素蛋白的宿主细胞是大肠杆菌。

12.根据权利要求8至11中任一项所述的制备重组凝集素蛋白的方法，其特征在于，其中所述诱导剂为IPTG。

13.根据权利要求8至12中任一项所述的制备重组凝集素蛋白的方法，其特征在于，其中所述诱导剂以不超过0.5mM的浓度添加到所述培养物中。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的制备重组凝集素蛋白的方法，其特征在于，其中所述重组凝集素蛋白选自以下：

a.SEQ ID NO.1；

b.SEQ ID NO.3；

c.SEQ ID NO.4；或

d.与a、b或c具有至少60％、70％、80％、90％、95％、97％、98％或99％同源性的氨基酸序列。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的制备重组凝集素蛋白的方法，其特征在于，其中进一步包括：

a)可选的，将重组凝集素基因克隆到表达载体中并将所述表达载体插入宿主细胞中；

b)在合适的培养基中培养所述宿主细胞，其中所述培养包括在25℃到40℃的温度下进行的生长期和表达由重组凝集素基因编码的重组凝集素蛋白的表达期，其中所述生长期的温度为15℃到30℃并且所述表达期内维持的碳氮比为3∶1到6∶1；

c)可选的，分离(b)中表达的所述重组凝集素蛋白以获得粗重组凝集素蛋白；以及

d)可选的，纯化所述粗重组凝集素蛋白以获得重组凝集素蛋白分离物。

16.根据权利要求1所述的制备重组凝集素蛋白的方法，其特征在于，其中所述步骤(a)中的表达载体如图1所示。