[发明专利]莎草奥酮的微生物生产在审
| 申请号： | 201980060571.5 | 申请日： | 2019-09-06 |
| 公开（公告）号： | CN113195726A | 公开（公告）日： | 2021-07-30 |
| 发明（设计）人： | 莱恩·N·菲力浦;阿吉库玛·帕拉伊尔·库马兰;克里斯汀·尼科尔·S·桑托斯;詹森·唐纳德;斯蒂芬·萨里亚 | 申请（专利权）人： | 马努斯生物合成股份有限公司 |
| 主分类号： | C12P5/00 | 分类号： | C12P5/00;C12P7/26;A01N27/00;C12N9/02 |
| 代理公司： | 北京安杰律师事务所 11627 | 代理人： | 杨剑;吴立 |
| 地址： | 美国马*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 莎草 微生物 生产 | ||
1.一种用于产生莎草奥酮的微生物宿主细胞，所述微生物细胞表达异源α-愈创木烯合酶(αGTPS)和异源α-愈创木烯氧化酶(αGOX)。
2.如权利要求1所述的微生物细胞，所述微生物细胞进一步表达法呢基二磷酸合酶。
3.如权利要求2所述的微生物细胞，其中所述αGTPS酶包含SEQ ID NO:1至21中的任一个的氨基酸序列或其变体。
4.如权利要求3所述的微生物细胞，其中α-愈创木烯合酶包含与SEQ ID NO:1至21中的任一个具有50％或更高序列同一性的氨基酸序列。
5.如权利要求3所述的微生物细胞，其中所述αGTPS酶包含与SEQ ID NO:8具有50％或更高序列同一性的氨基酸序列。
6.如权利要求5所述的微生物细胞，其中所述αGTPS酶包含选自相对于SEQ ID NO:8的以下的位置处的一个或多个氨基酸取代：72、273、290、368、371、374、377、381、382、399、406、419、433、442、443、454、512和522。
7.如权利要求6所述的微生物细胞，其中所述αGTPS酶包含选自相对于SEQ ID NO:8的以下的一个或多个氨基酸取代：T72I、M273L、R290K、F368M、I371L、S374A、R377V、Y381W、F382L、I399V、F406L、L419T、V433I、Y442L、I443M、E454K、F512L和K522D。
8.如权利要求4所述的微生物细胞，其中所述α-愈创木烯合酶主要从FPP底物产生α-愈创木烯作为产物。
9.如权利要求1至8中任一项所述的微生物细胞，其中所述αGOX酶是细胞色素P450(CYP450)酶。
10.如权利要求9所述的微生物细胞，其中所述CYP450包含SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26的氨基酸序列或其变体。
11.如权利要求10所述的微生物细胞，其中所述CYP450包含与SEQ ID NO:51、52或22至26中的任一个具有50％或更高序列同一性的氨基酸序列。
12.如权利要求9所述的微生物细胞，其中所述CYP450包含与SEQ ID NO:51具有50％或更高序列同一性的氨基酸序列。
13.如权利要求9所述的微生物细胞，其中所述CYP450包含与SEQ ID NO:52具有50％或更高序列同一性的氨基酸序列。
14.如权利要求1至13中任一项所述的微生物细胞，其中所述微生物宿主细胞表达细胞色素P450还原酶。
15.如权利要求1至14中任一项所述的微生物细胞，其中所述αGTPS和αGOX一起在操纵子中表达。
16.如权利要求1至15中任一项所述的微生物细胞，其中所述微生物宿主细胞进一步表达一种或多种醇脱氢酶(ADH)。
17.如权利要求16所述的微生物细胞，其中所述ADH包含SEQ ID NO:35至44中的任一个的氨基酸序列或其变体。
18.如权利要求11所述的微生物细胞，其中所述ADH包含与SEQ ID NO:43具有50％或更高序列同一性的氨基酸序列。
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