[发明专利]提高真菌孢子的储存稳定性的方法

说明书

本发明涉及生产具有延长的储存稳定性的真菌孢子或延长真菌孢子的储存稳定性的方法，所述方法包括使真菌孢子经受干燥步骤以使残余水分含量为12％以下；以及涉及包含通过所述方法获得的真菌孢子的组合物。

无论是用于防止各种真菌有害生物或昆虫害虫，还是用于改善植物健康，生物防治剂在植物保护领域中都变得越来越重要。尽管也有病毒可用作生物防治剂，但迄今为止在该领域中使用的主要是基于细菌和真菌的那些。基于真菌的生物防治剂的最突出的形式是被称为分生孢子以及芽生孢子的无性孢子，但其他真菌繁殖体也可能是有前景的防治剂，如(微)菌核、子囊孢子、担孢子、厚垣孢子或菌丝段。

与许多基于细菌的孢子(如芽孢杆菌孢子)不同，许多真菌孢子不那么健壮，并且已证明难以以满足商业产品需要(特别是在一定温度下——如果可能通常在室温下——的可接受的储存稳定性)的形式提供真菌孢子。尽管在过去主要通过对每个真菌种单独开发改进的制剂来解决该问题，但仍然需要提供一种提高真菌孢子的储存稳定性的通用方法，该方法不需要大量的实验为每个菌种找到合适的制剂。

关于水分含量对真菌孢子储存稳定性的影响存在不同的观点。Moore等人(Biocontrol Science and Technology 1996,6:51-61)记载了4-5％的水分含量适于使用油储存或干燥储存将黄绿僵菌(M.flavoviridae)孢子储存3个月。最近，微囊化和真菌孢子干燥的组合方法被用于提高棕色绿僵菌(M.brunneum)菌株的储存稳定性(Przyklenk等人，2017,Journal of Microencapsulation 34(5):498–512)。然而，该使用层流和干燥器的两步干燥方法得到的孢子的存活率在三个月后仅为50％，而在六个月后为1％。值得注意的是，没有残余水分含量的报道，并且观察到干燥时有高损失。过去经常使用脱水来获得干燥的真菌孢子。Daoust等人Journal of Invertebrate Pathology 1983,41:151-160使用该方法，使得金龟子绿僵菌(M.anisopliae)分生孢子12个月后储存稳定性达到35％。Kim等人(Mycobiology 2014,42(1):59-65)报道了使用空气干燥来干燥球孢白僵菌(Beauveriabassiana)最长达140h，然而未进行长期实验。Horaczek和Viernstein(BiologicalControl 2004,31:65–71)使用三种不同的干燥方法来尝试稳定真菌孢子。

然而，仍然需要提供具有提高到商业水平的储存稳定性的真菌孢子。该技术问题在本发明中至少部分地得以解决。

因此，在第一方面，本发明涉及生产具有延长的储存稳定性的真菌孢子或延长真菌孢子的储存稳定性的方法，所述方法包括使真菌孢子经受干燥步骤以使残余水分含量小于12％。

真菌孢子包括有性形成的孢子(例如卵孢子、接合孢子或子囊孢子)和无性形成的孢子(例如分生孢子和厚垣孢子，还有夏孢子、冬孢子和黑粉菌孢子)。优选地，孢子是分生孢子。

储存稳定性表示真菌孢子在给定时间后发芽的能力。特别地，商业水平的储存稳定性是指在室温下3个月后、优选在6个月后真菌孢子的发芽率至少为80％。

与本发明有关的延长的储存稳定性意味着真菌孢子可以以至少80％的发芽率储存至少6个月。优选地，以该发芽率，真菌孢子可储存甚至8个月或甚至10个月或甚至12个月。从所附的实施例中可以明显看出，真菌孢子，例如棕色绿僵菌(Metarhizium brunneum)的孢子，更特别地是菌株F52，可最优选地以至少80％的发芽率保存甚至12个月。尽管优选在室温下存在储存稳定性，但它至少也将在较低温度下存在。较低的温度可始于4℃，优选10℃，更优选15℃。

本发明发现，水分含量低于12％的干燥的真菌孢子有助于增强真菌孢子的储存稳定性。通常认为，水分含量越低，储存稳定性进一步提高。在某些情况下，可能不应将水分含量降低到一定阈值以下。

孢子的干燥可以使用本领域已知的方法进行，特别是真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥或脱水。