[发明专利]用于产生乙酸补身烷基酯化合物的方法

权利要求书

1.一种产生乙酸补身烷基酯化合物的生物催化方法，

包括以下步骤：

(1)在乙酰基供体的存在下使补身烷基醇与多肽接触，该多肽具有能将乙酰基从所述乙酰基供体转移至所述补身烷基醇的EC 2.3.1类酶的乙酰基转移酶活性，从而获得乙酸补身烷基酯；和

(2)可选地，从步骤(1)的反应产物中分离出乙酸补身烷基酯化合物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述乙酸补身烷基酯化合物从由如下构成的群组中选出：乙酸折叶苔基酯，乙酸补身烯基酯，和乙酸双环法呢基酯，其各自为立体异构纯形式或作为其至少两种立体异构体的混合物，或它们的组合，其包括所述群组的至少两个成员。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述补身烷基醇从由如下构成的群组中选出：折叶苔醇，补身醇和双环法呢醇，其各自为立体异构纯形式或作为其至少两种立体异构体的混合物，或它们的组合，其包括所述群组的至少两个成员。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述乙酰基供体是乙酰辅酶A(乙酰基-CoA)。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述乙酰基转移酶选自：

a)包含选自SEQ ID NO:9、17、118、124、144、23、21、11、19、13、15、25、121、143、127、130、133或136的氨基酸序列的多肽，和

b)具有乙酰基转移酶活性并包含与SEQ ID NO:SEQ ID NO:9、17、118、124、144、23、21、11、19、13、15、25、121、143、127、130、133或136的至少一个所述氨基酸序列显示至少40％序列同一性的氨基酸序列的多肽。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，还包括在步骤1)之前，所述补身烷基醇化合物的生物催化形成，特别是由非环状倍半萜前体如法呢基焦磷酸(FPP)的酶促合成。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述补身烷基醇的所述酶促合成是通过一种或多种多肽来催化的，该多肽具有在一个或多个酶促步骤中将所述非环状倍半萜前体转化为至少一种补身烷基醇的能力。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述至少一种补身烷基醇是在单个或多个酶促步骤中由FPP产生的。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述至少一种补身烷基醇是通过FPP的酶促转化，由如下物质催化产生的：

a)具有形成所述补身烷基醇的补身烷倍半萜合酶活性的多肽；或

b)具有形成至少一种磷酸补身烷基酯中间体的磷酸补身烷基酯合酶活性的多肽与具有将所述至少一种磷酸补身烷基酯中间体转化为至少一种补身烷基醇的磷酸酶活性的多肽的组合。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，

a)所述具有补身烷倍半萜合酶活性的多肽选自具有折叶苔醇合酶活性，补身醇合酶活性，双环法呢醇合酶活性或这些活性的任何组合的多肽；和

b)多肽的所述组合包括补身烷基二磷酸合酶活性，特别是折叶苔基二磷酸合酶活性和磷酸酶。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述补身烷倍半萜合酶选自：

a)具有折叶苔醇合酶活性并且包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的多肽，或具有折叶苔醇合酶活性并且包含与SEQ ID NO:5具有至少40％序列同一性的氨基酸序列的突变体或变体多肽；

b)具有补身醇合酶活性并且包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的多肽，或具有补身醇合酶活性并且包含与SEQ ID NO:7具有至少40％序列同一性的氨基酸序列的突变体或变体多肽。

12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其在细胞培养物中在体内或在液体反应介质中在体外进行，每种均在有利于产生至少一种乙酸补身烷基酯的条件下进行。