[发明专利]连续细胞培养方法

权利要求书

1.一种方法，所述方法包括：

在具有至少25L培养基和至多20m/s的气体出口速度的生物反应器系统中培养由剪切敏感性细胞组成的细胞群体，以在所述培养基中达到在20x10⁶个细胞/mL至15x10⁷个细胞/mL范围内的稳态活细胞浓度。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述气体出口速度是15m/s、14m/s、13m/s、12m/s、11m/s、10m/s、9m/s、8m/s或更低。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中控制所述气体出口速度，至少直到所述生物反应器系统达到稳态条件。

4.如权利要求3所述的方法，其中所述稳态条件包括具有在5天的时间段内改变至多20％的活细胞浓度。

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中在整个所述培养步骤中控制所述气体出口速度。

6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述生物反应器系统是灌注生物反应器系统。

7.如权利要求6所述的方法，其中在所述灌注生物反应器系统中培养所述由剪切敏感性细胞组成的细胞群体以达到所述稳态活细胞浓度包括排出或除去过量细胞和/或非活细胞。

8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述培养基具有至多120mmHg、至多115mmHg、至多110mmHg、至多105mmHg、至多100mmHg、至多95mmHg、至多90mmHg、至多85mmHg或至多80mmHg的溶解二氧化碳水平。

9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中

(i)所述气体出口速度是10m/s或更低；并且

(ii)所述培养基具有至多80mmHg的溶解二氧化碳水平。

10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述生物反应器系统包括至少50L、至少100L、至少200L、至少500L、至少1,000L或至少2,000L的培养基。

11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中培养进行至少10天的持续时间。

12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中培养进行30至60天的持续时间。

13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述方法还包括测量所述活细胞浓度。

14.如权利要求13所述的方法，其中所述测量的活细胞浓度是至少30x10⁶个细胞/mL、至少40x10⁶个细胞/mL或至少50x10⁶个细胞/mL。

15.如权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述剪切敏感性细胞是哺乳动物细胞。

16.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述剪切敏感性细胞是人类细胞。

17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述剪切敏感性细胞是HEK 293细胞、纤维肉瘤HT 1080细胞、PER.C6细胞、CAP细胞、HKB-11细胞或HuH-7细胞。

18.如权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述剪切敏感性细胞是鼠类细胞。

19.如权利要求1-15和18中任一项所述的方法，其中所述剪切敏感性细胞来自小鼠骨髓瘤细胞系。