[发明专利]包含无有机溶剂和去污剂的转染活性囊泡的组合物和系统以及与之相关的方法

说明书

将通常在本文中称为转染活性囊泡(TCV)的脂基囊泡配置成安全且有效地将DNA、RNA、其他核酸和蛋白质货物递送到靶细胞中。安全性和效率之一和两者都部分地通过从TCV装载过程(即将货物插入TCV)、TCV储存过程和/或TCV递送过程中消除有机溶剂(例如乙醇)和去污剂(例如十二烷基硫酸钠)来实现。所述货物还可包含与蛋白质(例如核糖核蛋白(RNP))复合的核酸。在一些实施方案中，本文所述的系统、组合物、装置和方法等都可提供所需的无需使用专门设备就可台式装载的空TCV。

相关申请的交叉引用

本申请要求共同未决的、2018年10月9日提交的美国临时专利申请序列号62/743,116的权益，该申请通过引用整体并入本文。

背景技术

科学研究和医学治疗的重要领域之一是希望选择性地和有效地将RNA、DNA、其他核酸和/或蛋白质货物(cargo)递送至靶位点，例如特定靶细胞。出于多种原因，这可能是有帮助的，包括改善患者治疗(例如基因治疗)以及用于治疗癌症和其他病况。例如，基因治疗可能能够用于大脑和整个中枢神经系统以治疗人类可能遭受的一些典型的可怕的神经系统病症，例如阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病、额颞叶痴呆、肌萎缩侧索硬化、脊髓性肌萎缩等。目前的基因治疗方法在其广泛应用的同时存在几个问题，特别是对于人类患者而言，例如因为需要将治疗性核酸携带到患者体内的包装的重复施用和毒性。当前本文所述的组合物、方法等有助于解决一个或多个这些问题或其他此类问题。

关于将DNA和其他核酸递送到靶位点(例如脑中的患病细胞)的更科学的讨论，用于这种递送的现有方法包括脂质颗粒，在一些情况下被称为脂质纳米颗粒(“LNP”)或脂质体。术语脂质纳米颗粒或“LNP”用于描述在约中性pH下的脂基颗粒，其通常含有核酸并具有电子致密核。脂质体，也称为囊泡，是具有单个双层和水性核心的脂基结构。LNP形成的典型已知方法是在初始囊泡形成时将特定货物装载到囊泡。这些方法进一步使用专门仪器、有机溶剂和/或去污剂，需要大量材料并包括数天的处理时间，所有这些都严重阻碍了实用性、可及性和治疗可用性。

LNP和其他脂质颗粒通常包含可电离的阳离子脂质、一种或多种磷脂、胆固醇(Chol)和聚乙二醇-脂质(PEG-脂质)(Maurer,Wong等人,2001；Semple,Klimuk等人,2001；Semple,Akinc等人,2010；Belliveau,Huft等人,2012；Leung,Hafez等人,2012；Suhr,Coelho等人,2015)。(本文列出了讨论某些系统、设备、方法和其他信息的各种参考文献；无论参考文献在本申请中可能出现的位置，所有这些参考文献都通过引用整体并入本文并包括其所有教导和公开内容。本文对参考文献的引用并不是对这些参考文献构成本申请现有技术的承认。)LNP组合物的示例是比例为50/10/38.5/1.5mol％的可电离阳离子脂质、磷脂、胆固醇和聚乙二醇(PEG)-脂质(分别)的组合。已表明该组合物在静脉内施用后显示出有效的肝细胞基因沉默(siRNA)或表达(mRNA)(Semple,Akinc等人,2010；Jayaraman,Ansell等人,2012；Pardi,Tuyishime等人,2015；Suhr,Coelho等人，2015)。其他人已经描述了由比例为50/10/38.5/1.5摩尔％的可电离的阳离子脂质、磷脂、胆固醇和聚乙二醇(PEG)-脂质组成的LNP组合物，作为培养物中的原代神经元细胞的siRNA递送以及用于递送至脑(Rungta,Choi等人,2013)。