[发明专利]用于跨非连续模板的有序和连续的互补DNA(cDNA)合成的组合物和方法有效
| 申请号： | 201980066006.X | 申请日： | 2019-08-08 |
| 公开（公告）号： | CN112805373B | 公开（公告）日： | 2023-05-12 |
| 发明（设计）人： | K·柯林斯;H·E·厄普顿 | 申请（专利权）人： | 加利福尼亚大学董事会 |
| 主分类号： | C12N9/12 | 分类号： | C12N9/12;C12N9/22;C12N9/00 |
| 代理公司： | 北京泛华伟业知识产权代理有限公司 11280 | 代理人： | 郭广迅;李渤 |
| 地址： | 美国加利*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 连续 模板 有序 互补 dna cdna 合成 组合 方法 | ||
1.一种分离的真核非长末端重复序列逆转录酶蛋白，其包含截短的N末端区域、RNA结合结构域、RT结构域和核酸内切酶结构域，其中所述核酸内切酶结构域包含消除核酸内切酶功能的突变，其中所述真核非长末端重复序列逆转录酶蛋白是家蚕R2 RT蛋白，所述截短的N末端区域导致与具有氨基酸序列SEQ ID NO:1的对应的全长非长末端重复序列逆转录酶蛋白相比，非长末端重复序列逆转录酶蛋白的N末端274个氨基酸缺失，并且所述消除核酸内切酶功能的突变是全长家蚕R2 RT(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基D996处的置换突变，并且所述置换突变是D996A突变。
2.权利要求1所述的真核非长末端重复序列逆转录酶蛋白，其还包含稳定蛋白，其中所述稳定蛋白是麦芽糖结合蛋白。
3.权利要求2所述的真核非长末端重复序列逆转录酶蛋白，其中所述稳定蛋白是麦芽糖结合蛋白并且连接到所述真核非长末端重复序列逆转录酶蛋白的N末端。
4.权利要求1所述的真核非长末端重复序列逆转录酶蛋白，其还包含纯化标签，其中所述纯化标签是组氨酸标签、蛋白A标签或FLAG肽标签。
5.权利要求4所述的真核非长末端重复序列逆转录酶蛋白，其中所述组氨酸标签是6x-组氨酸标签。
6.权利要求4或5所述的真核非长末端重复序列逆转录酶蛋白，其中所述纯化标签连接到所述真核非长末端重复序列逆转录酶蛋白的C末端。
7.权利要求1所述的真核非长末端重复序列逆转录酶蛋白，其氨基酸序列如SEQ IDNO:2所示。
8.权利要求1所述的真核非长末端重复序列逆转录酶蛋白，其氨基酸序列如SEQ IDNO:3所示。
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