[发明专利]提高氨基酸球菌属CPF1的DNA切割活性的新型突变

权利要求书

1.CRISPR相关蛋白，其包含编码AsCpf1变体的多肽，其中所述AsCpf1变体选自由以下项组成的组：M537R(SEQ ID NO.:472)、F870L(SEQ ID NO.:473)和M537R/F870L(SEQ IDNO.:465)。

2.根据权利要求1所述的CRISPR相关蛋白，其中所述AsCpf1变体为M537R(SEQ ID NO.:472)。

3.根据权利要求1所述的CRISPR相关蛋白，其中所述AsCpf1变体为F870L(SEQ ID NO.:473)。

4.根据权利要求1所述的CRISPR相关蛋白，其中所述AsCpf1变体为M537R/F870L(SEQID NO.:465)。

5.CRISPR核糖核蛋白复合体，其包含：

向导RNA；和

CRISPR相关蛋白，所述CRISPR相关蛋白包含编码AsCpf1变体的多肽，其中所述AsCpf1变体选自由以下项组成的组：M537R(SEQ ID NO.:472)、F870L(SEQ ID NO.:473)和M537R/F870L(SEQ ID NO.:465)。

6.根据权利要求5所述的CRISPR核糖核蛋白复合体，其中所述AsCpf1变体为M537R(SEQID NO.:472)。

7.根据权利要求5所述的CRISPR核糖核蛋白复合体，其中所述AsCpf1变体为F870L(SEQID NO.:473)。

8.根据权利要求5所述的CRISPR核糖核蛋白复合体，其中所述AsCpf1变体为M537R/F870L(SEQ ID NO.:465)。

9.用CRISPR核糖核蛋白复合体提高细胞中TTTN PAM位点处的基因编辑效率的方法，所述方法包括：

使细胞与根据权利要求5-8中任一项所述的CRISPR核糖核蛋白复合体接触。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述TTTN PAM位点是由选自TTTA、TTTT和TTTCPAM位点的组中的一个组成。

11.试剂盒，其包含向导RNA和CRISPR相关蛋白，所述CRISPR相关蛋白包含编码AsCpf1变体的多肽，其中所述AsCpf1变体选自由以下项组成的组：M537R(SEQ ID NO.:472)、F870L(SEQ ID NO.:473)和M537R/F870L(SEQ ID NO.:465)。

12.根据权利要求11所述的试剂盒，其中所述AsCpf1变体为M537R(SEQ ID NO.:472)。

13.根据权利要求11所述的试剂盒，其中所述AsCpf1变体为F870L(SEQ ID NO.:473)。

14.根据权利要求11所述的试剂盒，其中所述AsCpf1变体为M537R/F870L(SEQ ID NO.:465)。

15.CRISPR相关蛋白，其包含编码AsCas12a变体的多肽，其中所述AsCas12a变体选自由至少一个选自氨基酸位置499-640和840-913的变异氨基酸组成的组，前提条件是所述变异AsCas12a在非规范TTTT PAM位点处提供CRISPR/AsCas12a相关核酸酶活性的改善。

16.根据权利要求15所述的CRISPR相关蛋白，其中所述AsCas12a变体选自由SEQ IDNO.:59-245组成的组。