[发明专利]用于制备病毒载体的组合物和方法在审

专利信息
申请号: 201980066189.5 申请日: 2019-10-08
公开(公告)号: CN112805387A 公开(公告)日: 2021-05-14
发明(设计)人: 肖卫东;余湘萍 申请(专利权)人: 耐克基因有限责任公司
主分类号: C12N15/86 分类号: C12N15/86;C12N15/861;C12N15/864;C12N15/63
代理公司: 北京市汉坤律师事务所 11602 代理人: 张琳琳;吴丽丽
地址: 美国宾夕*** 国省代码: 暂无信息
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摘要:
搜索关键词: 用于 制备 病毒 载体 组合 方法
【权利要求书】:

1.一种用于产生重组病毒的衣壳化缺陷型腺病毒(edAd),所述edAd包含:

具有一个或多个突变的edAd基因组,所述一个或多个突变导致(1)一种或多种衣壳化必需蛋白的显著降低的产生或不产生,和/或(2)一种或多种缺陷型衣壳化必需蛋白的产生。

2.如权利要求1所述的edAd,其中所述一种或多种衣壳化必需蛋白选自由以下构成的组:衣壳蛋白IX、衣壳化蛋白IVa2、蛋白13.6、衣壳化蛋白52K、衣壳蛋白前体pIIIa、五邻体基底(衣壳蛋白III)、核心蛋白前体pVII、核心蛋白V、核心蛋白前体pX、衣壳蛋白前体pVI、六邻体(衣壳蛋白II)、蛋白酶、六邻体组装蛋白100K、蛋白33K、衣壳化蛋白22K、衣壳蛋白前体pVIII、蛋白UXP和纤维(衣壳蛋白IV)。

3.如权利要求1所述的edAd,其中所述一个或多个突变包含导致衣壳蛋白前体pIIIa不表达的突变。

4.如权利要求3所述的edAd,所述edAd进一步包含蛋白V、六邻体、Iva2、L1-52/55k和/或L4-22K中的一个或多个缺失。

5.如权利要求3所述的edAd,所述edAd进一步包含纤维蛋白中的缺失。

6.如权利要求1所述的edAd,其中所述一个或多个突变包含所述六邻体组装蛋白100K的缺失。

7.如权利要求1所述的edAd,所述edAd进一步包含腺病毒早期基因中的一个或多个缺失。

8.如权利要求7所述的edAd,所述edAd包含腺病毒早期基因E1中的缺失。

9.如权利要求7所述的edAd,所述edAd包含腺病毒早期基因E1和E3中的缺失。

10.如权利要求7所述的edAd,所述edAd包含腺病毒早期基因E1、E3和E4中的缺失。

11.如权利要求1所述的edAd,所述edAd进一步包含编码重组AAV的基因组的序列。

12.如权利要求11所述的edAd,其中所述重组AAV的基因组包含表达盒,所述表达盒包含与控制序列可操作地连接的靶基因,其中所述表达盒在每一端的侧翼带有AAV ITR。

13.如权利要求1所述的edAd,所述edAd进一步包含与控制序列可操作地连接的CRE的编码序列。

14.如权利要求1所述的edAd,所述edAd进一步包含慢病毒的gag和pol蛋白的编码序列。

15.如权利要求1所述的edAd,所述edAd进一步包含慢病毒的VSV-G蛋白的编码序列。

16.一种产生重组病毒(RV)的方法,所述方法包括以下步骤:

(a)用一种或多种edAd感染生产细胞以产生感染的生产细胞,其中所述一种或多种edAd能够在所述生产细胞中进行DNA复制,但不能进行病毒颗粒形成,并且其中所述一种或多种edAd或所述生产细胞包含RV基因组;

(b)在允许产生具有所述RV基因组的RV的条件下孵育所述感染的生产细胞;以及

(c)收获所述RV。

17.如权利要求16所述的方法,其中所述RV是AAV。

18.如权利要求17所述的方法,其中所述一种或多种edAd包含AAV基因组。

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