[发明专利]用于检测和分析自由硫醇的系统和方法

权利要求书

1.一种方法，其包括：

由含有多种蛋白质同种型的样品产生第一样品部分和第二样品部分，来自所述多种蛋白质同种型的至少一些蛋白质同种型具有一个或多个自由硫醇基；

将荧光检测结合剂施加到所述第一样品部分，所述荧光检测结合剂被配置成与自由硫醇基结合以产生缀合的硫醇，而不会还原包含在所述第一样品部分中的所述多种蛋白质同种型；

将所述第一样品部分中的所述多种蛋白质同种型分离，以产生第一组分离的蛋白质同种型；

将所述第二样品部分中的所述多种蛋白质同种型分离，以产生第二组分离的蛋白质同种型；

检测与所述缀合的硫醇相关的第一荧光信号和与所述第一组分离的蛋白质同种型相关的吸光度信号；

基于所述吸光度信号，鉴定来自所述第一组分离的蛋白质同种型的每种分离的蛋白质同种型的数量或身份中的至少一个；

检测与所述第二组分离的蛋白质同种型相关的第二荧光信号；以及

基于所述第一荧光信号与所述第二荧光信号之间的差异，测量与来自所述第一组分离的蛋白质同种型的每种分离的蛋白质同种型相关的自由硫醇基的数量。

2.根据权利要求1所述的方法，其中：

鉴定来自所述第一组分离的蛋白质同种型的每种分离的蛋白质同种型的数量，所述方法进一步包括：

对于来自所述第一组分离的蛋白质同种型的每种分离的蛋白质同种型，基于所述蛋白质同种型的蛋白质同种型的数量和与所述蛋白质同种型相关的自由硫醇基的数量，确定与所述蛋白质同种型相关的自由硫醇基的数目。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述吸光度信号是第一吸光度信号，所述方法进一步包括：

检测与所述第二组分离的蛋白质同种型相关的第二吸光度信号，

来自所述第一组分离的蛋白质同种型的每种分离的蛋白质同种型的所述数量或所述身份中的所述至少一个是基于第二吸光度信号鉴定的。

4.根据权利要求1所述的方法，其中：

来自所述多种蛋白质同种型的至少一些蛋白质同种型具有一个或多个二硫基；

所述一个或多个自由硫醇基是第一组自由硫醇基；并且

所述缀合的硫醇是第一组缀合的硫醇，所述方法进一步包括：

由所述样品产生第三样品部分和第四样品部分；

将还原剂施加到所述第三样品部分和所述第四样品部分，所述还原剂被配置成还原二硫基以产生第二组一个或多个自由硫醇基；

将所述荧光检测结合剂施加到所述第三样品部分，使得所述荧光检测结合剂与所述第一组自由硫醇基和所述第二组自由硫醇基结合以产生第二组缀合的硫醇；

将所述第三样品部分中的所述多种蛋白质同种型分离，以产生第三组分离的蛋白质同种型；

将所述第四样品部分中的所述多种蛋白质同种型分离，以产生第四组分离的蛋白质同种型；

检测与所述第二组缀合的硫醇相关的第三荧光信号和与所述第三组分离的蛋白质同种型相关的第二吸光度信号；

基于所述第二吸光度信号，鉴定来自所述第三组分离的蛋白质同种型的每种分离的蛋白质同种型的数量或身份中的至少一个；

检测与所述第四组分离的蛋白质同种型相关的第四荧光信号；以及

基于所述第三荧光信号与所述第四荧光信号之间的差异，测量与来自所述第三组分离的蛋白质同种型的每种分离的蛋白质同种型相关的所述第一组自由硫醇基的数量和二硫基的数量。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述第一组自由硫醇基的所述数量和二硫基的所述数量总体地是与所述多种蛋白质同种型相关的总硫醇的数量，所述方法进一步包括：

基于总硫醇的所述数量与所述第一组自由硫醇基的所述数量之间的差异，确定二硫基的所述数量。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一样品部分中的所述多种蛋白质同种型和第二样品部分中的所述多种蛋白质同种型是通过等电聚焦分离的。