[发明专利]免去层析的抗体纯化方法

说明书

本发明涉及用于纯化抗体的方法，所述方法包括有限数量的步骤，同时仍允许以适当的纯度水平获得高产率的经纯化抗体。简而言之，此方法仅包括过滤和沉淀步骤，而省略了对层析步骤的需要。

1技术领域

本发明涉及用于纯化抗体的方法，所述方法包括有限数量的步骤，同时仍允许以优异的纯度水平获得高产率的经纯化抗体。简而言之，此方法仅包括过滤和沉淀步骤，而省略了对层析步骤的需要。

2背景技术

抗体纯化可能是生物生产中最昂贵的方面之一。抗体(Ab)及其片段通常使用多步骤层析方法来纯化，在每个层析步骤中使用特定的树脂和缓冲液系统。此常规纯化方法包括捕获步骤，随后是离子交换步骤，并且以UF/DF步骤结束。随着细胞培养滴度的增加和将用于生产的细胞培养体积的增加，下游加工被视为工业的瓶颈。这与单克隆抗体(mAb)生产特别相关，在单克隆抗体生产中，重点已从批量容量转移到下游加工能力。此外，早期的临床前和临床阶段研究需要更大量的可以更快地生产的抗体。另外，层析步骤是决定商品成本(CoG)的最重要因素之一。

本行业探索了减少用于抗体纯化的步骤数量。

WO 2011/090719公开了用于纯化抗体的方法，所述方法包括2个或3个层析步骤，第一层析步骤涉及使用蛋白A柱，第二层析步骤涉及使用阳离子交换层析柱，并且任选的第三层析步骤涉及使用阴离子交换层析柱。

WO 2009/111347公开了在比蛋白A柱洗脱缓冲液中常规使用的pH高的pH下装载多模式树脂层析，这表明需要在两个层析步骤之间交换缓冲液。

WO 2014/180852涉及使用由母液制成的四种缓冲溶液对蛋白质(特别是mAb)进行小规模和大规模纯化的3步层析方法。

WO 2013/075740描述了仅使用由母液制成的4种缓冲溶液的抗体纯化方法，其使用2步层析方法纯化蛋白质。

WO 2010/056550描述了尤其使用2个层析步骤的纳米抗体纯化方法。

层析步骤在抗体纯化中的广泛使用可以通过此方法在经纯化产物的品质上的成功来解释，所述纯化产物最终可能用于人类。因此，优选的是，任何新的纯化方法都必须保持允许最终产品用于人类的品质。

将层析步骤的数量减少到只有2个驱使加工时间和CoG下降。

然而，仍然需要优化抗体纯化，如进一步降低抗体生产和加工时间的CoG，同时优选地保持品质。

3发明内容

从宿主细胞中纯化目的蛋白(如Ab)的问题是巨大数量和大小的杂质。这些杂质可能大于目的蛋白，小于目的蛋白，或者甚至与目的蛋白具有相同的大小。这使得纯化过程成为一项具有挑战性的任务，这同时通过冗长且昂贵的层析方法来解决。

诸位发明人已发现了一种用于纯化抗体的新方法，所述方法包括有限数量的步骤，同时仍允许以优异的纯度水平获得高产率的经纯化抗体。简而言之，此方法仅包括过滤和沉淀步骤。在证明了在获得经纯化蛋白方面的适宜性后，诸位发明人还表明所述方法可容易地扩展。本发明的纯化方法的商品成本大大低于常规层析方法。实际上，按比例放大到100L已比可比的层析方法便宜86％。另外，通过使用仅需要更换盒和缓冲液的单个切向流过滤装置可以进一步简化所述方法。为了进一步最小化CoG，可以最小化DV步骤的数量，同时维持所需的纯度水平。

本质上，本发明的用于从溶液中纯化蛋白质的方法基本上包括：

(a)第一过滤步骤，其中将所述目的蛋白与较大杂质分离；

(b)第二过滤步骤，其中将所述目的蛋白与较小杂质分离；

(c)沉淀、洗涤和重悬浮步骤，其中将所述目的蛋白与任何其他剩余的杂质分离；以及

(d)超滤/渗滤(UF/DF)步骤，其中将所述目的蛋白在主缓冲液中浓缩。