[发明专利]褐色脂肪细胞上清、其制备法及使用

权利要求书

1.一种具有糖代谢改善作用的组合物，其包含褐色脂肪细胞的上清。

2.如权利要求1所述的组合物，其中，

所述褐色脂肪细胞的上清不包含含有BMP7、VEGF、SCF、Flt3L、IL6及IGF2的细胞因子鸡尾酒。

3.如权利要求1或2所述的组合物，其中，

褐色脂肪细胞的上清不含外源性细胞因子。

4.如权利要求1至3中的任一项所述的组合物，其中，

褐色脂肪细胞是由多能性干细胞制得的褐色脂肪细胞。

5.如权利要求1至4中的任一项所述的组合物，其中，

褐色脂肪细胞是由无饲养层培养的多能性干细胞制得的褐色脂肪细胞。

6.如权利要求1至5中的任一项所述的组合物，其中，

褐色脂肪细胞是不添加包含BMP4、VEGF、SCF、Flt3L、IL6及IGF2的细胞因子鸡尾酒和/或包含BMP7、VEGF、SCF、Flt3L、IL6及IGF2的细胞因子鸡尾酒而从多能性干细胞生成的褐色脂肪细胞。

7.如权利要求1至6中的任一项所述的组合物，其中，

上清为通过使褐色脂肪细胞与盐类缓冲液一起孵育而制得的上清。

8.如权利要求7所述的组合物，其中，

盐类缓冲液含有葡萄糖。

9.一种制造权利要求7或8所述的组合物的方法，其包括：

(1)通过无饲养层维持培养多能性干细胞的步骤，

(2)在无血清环境下非贴壁培养步骤(1)的细胞，使其形成细胞凝聚体的步骤，

(3)在无血清环境下培养步骤(2)的细胞，使其分化为褐色脂肪细胞的步骤，

(4)在盐类缓冲液中孵育步骤(3)的褐色脂肪细胞，并回收其上清的步骤。

10.一种能够用于权利要求1至9中的任一项所述的组合物或该组合物的制造中的褐色脂肪细胞的制造方法，其包括：

(1)通过无饲养层维持培养多能性干细胞的步骤，

(2)使步骤(1)的细胞分散，不添加包含BMP4、VEGF、SCF、Flt3L、IL6及IGF2的细胞因子鸡尾酒，并在无血清环境下进行非贴壁培养，形成细胞凝聚体的步骤，

(3)不添加包含BMP7、VEGF、SCF、Flt3L、IL6及IGF2细胞因子鸡尾酒，在无血清环境下，培养步骤(2)的细胞的步骤。

11.如权利要求10所述的方法，其进一步包括：

(4)在盐类缓冲液中孵育步骤(3)的褐色脂肪细胞，并回收其上清的步骤。

12.如权利要求9或11所述的方法，其中，

盐类缓冲液含有葡萄糖。

13.如权利要求9至12中的任一项所述的方法，其中，

在步骤(2)和/或(3)中，不与外源性细胞因子一起进行培养。

14.如权利要求9至13中的任一项所述的方法，其中，

在同样的培养容器中通过相同组分的培养基实施步骤(2)及(3)。

15.权利要求9至14中的任一项所述的方法，其进一步包括：

对得到的上清进行脱盐处理的步骤。

16.一种通过权利要求9至15中的任一项所述的方法制造的组合物。

17.如权利要求1至8及16中的任一项所述的组合物，其是医药或美容用组合物。