[发明专利]Cyclic-di-AMP钠盐晶体

说明书

Cyclic‑di‑AMP的冻干产品由于需要专用设备进行制造而不适合批量生产。Cyclic‑di‑AMP游离酸晶体在105℃的苛刻条件下不稳定。在此,提供一种Cyclic‑di‑AMP晶体,其可以容易地大量获得并且在105℃的苛刻条件下具有优异的稳定性成为课题。本发明的c‑di‑AMP钠盐晶体在105℃的苛刻条件下也极其稳定。另外,本发明的c‑di‑AMP钠盐晶体可通过将c‑di‑AMP水溶液调整为pH5.2～12.0之后添加有机溶剂的简单的方法可以批量制备。

【技术领域】

本发明涉及一种Cyclic-di-AMP的钠盐晶体,被认为是作为佐剂的有用物质。

【背景技术】

Cyclic-di-AMP(环二腺苷酸；以下称为“c-di-AMP”)是作为细菌的第二信使而被发现的物质。近年来,据报道该物质可诱导1型干扰素,并有望用作药物。(非专利文献1)。迄今为止,作为c-di-AMP的制造方法,已知有化学合成法(非专利文献2、3)以及使用来源于芽孢杆菌属或链球菌属的二癸二酸环化酶的的酶合成法(非专利文献4、5)。

目前普遍出售的c-di-AMP是冻干产品,另外关于晶体的获取仅报道了专利文献1所示的游离酸晶体(专利文献1)。一些以结晶固体(“crystalline solid”)的形式出售,但由于其不规则且压碎后会散开而不会开裂,市售的结晶固体无法成为晶体(图1)。

【现有技术文献】

【专利文献】

【专利文献1】WO2015/137469号

【非专利文献】

【非专利文献1】Science,328,1703-1705(2010)

【非专利文献2】SYNTHESIS,24,4230-4236(2006)

【非专利文献3】Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids,32,1-16(2013)

【非专利文献4】Molecular Cell,30,167-178(2008)

【非专利文献5】Nagoya J.Med.Sci.,73,49-57(2011)

【发明内容】

【发明要解决的问题】

冻干产品通常是c-di-AMP的已知产品,但是冻干产品在制造过程中需要冷冻干燥机,因此扩大规模进行批量生产存在自然的限制。因此,期望开发一种无需使用冷冻干燥机等特殊装置就能够容易地获取大量晶体的晶体获取方法。

此外,在本发明人的研究中,发现现有的c-di-AMP游离酸晶体具有在严酷条件下(例如105℃条件下)稳定性降低的缺点。

【用于解决问题的方案】

作为对c-di-AMP的结晶化的深入研究的结果,本发明人首次获得了c-di-AMP的钠盐晶体,从而完成了本发明。

【发明的效果】

在本发明人的研究中得知,通过以下工序获得的c-di-AMP钠盐晶体在105℃的苛刻条件下也极其稳定:(1)向c-di-AMP水溶液添加碱和/或酸,pH调整为5.2～12.0的工序；(2)使c-di-AMP水溶液在测量波长257nm处的吸光度OD₂₅₇成为500～20000的工序；(3)将c-di-AMP水溶液加热至30～70℃的工序；(4)向c-di-AMP水溶液添加有机溶剂的工序；(5)将c-di-AMP水溶液冷却至1～30℃的工序。

此外,与现有的c-di-AMP游离酸晶体相比,本发明的c-di-AMP钠盐晶体显示出高溶解性。

特别地,工序(1)的pH对于结晶化是重要的,并且在小于pH5.2的酸性条件下结晶化本身困难,即使能够获得晶体收率也将较低而非优选。相反,在pH5.2以上的条件下,只有容易获得钠盐晶体。因此,本发明的c-di-AMP钠盐晶体的制造方法适合于c-di-AMP盐晶体的批量生产。