[发明专利]提高苹果酸产量的新突变蛋白

权利要求书

1.一种丙酮酸羧化酶突变蛋白，其特征在于，所述丙酮酸羧化酶突变蛋白与SEQ IDNO: 1所示的序列相比，发生选自以下的核心氨基酸突变：

P826E、P826Q、P826Y、P826T、P826D或P826I；或

P824V和P826E；或

P826E、P824V和P1031E；

且所述的丙酮酸羧化酶突变蛋白具有将丙酮酸羧化合成苹果酸前体草酰乙酸的活性。

2.一种分离的多核苷酸或其组合，其特征在于，所述多核苷酸或其组合编码权利要求1所述的丙酮酸羧化酶突变蛋白。

3.一种载体，其特征在于，所述载体含有权利要求2所述的分离的多核苷酸。

4.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有权利要求3所述的载体，或所述宿主细胞的核酸中整合有权利要求2所述的分离的多核苷酸，并且所述宿主细胞不是植物品种或动物品种。

5.如权利要求4所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞选自下组：酿酒酵母、毕赤酵母或嗜热毁丝霉。

6. 一种制备权利要求1所述丙酮酸羧化酶突变蛋白的方法，其特征在于，包括步骤：

在适合表达的条件下，培养权利要求4所述的宿主细胞，从而表达权利要求1所述丙酮酸羧化酶突变蛋白；和

分离表达产物，从而获得权利要求1所述丙酮酸羧化酶突变蛋白。

7.一种提高苹果酸产量的方法，其特征在于，包括步骤：

i)将权利要求2所述的多核苷酸或其组合导入合适的宿主细胞；

ii)在碳源的存在下，培养所述的宿主细胞，从而提高苹果酸产量。

8.一种突变蛋白组合，其特征在于，所述突变蛋白组合含有权利要求1所述的丙酮酸羧化酶突变蛋白。

9.权利要求1所述丙酮酸羧化酶突变蛋白、权利要求2所述分离的多核苷酸或其组合、权利要求3所述载体、权利要求4所述宿主细胞、或权利要求8所述突变蛋白组合的应用，其特征在于，用于提高苹果酸产量。