[发明专利]表达PD-1结合蛋白的溶瘤病毒及其应用

权利要求书

1.一种溶瘤病毒，其包含编码能够抑制PD-1活性的PD-1结合蛋白的核酸序列，所述PD-1结合蛋白为包含PD-1单链抗体和免疫球蛋白Fc区段的融合多肽，所述融合多肽结构为：

S-V_L-L-V_H-Fc；

S为信号肽序列；

V_L为PD-1单链抗体的轻链可变区，其包含序列为RAGQNVQNYLA（SEQ ID NO：17）的CDR1、序列为NAQSLQT（SEQ ID NO：18）的CDR2以及序列为QQYNSWPT（SEQ ID NO：19）的CDR3；

L为连接序列；

V_H为PD-1单链抗体的重链可变区，其包含序列为GFSLSTSGT（SEQ ID NO：20）的CDR1、序列为CWEDS（SEQ ID NO：21）的CDR2以及序列为EDSGYFWFPY（SEQ ID NO：22）的CDR3；和

Fc是来自IgG的Fc区。

2.根据权利要求1所述的溶瘤病毒，其中所述病毒是腺病毒。

3.根据权利要求1所述的溶瘤病毒，其中所述病毒包含以survivin启动子驱动的E1A基因；和/或

E1B基因的活性降低或者完全失活。

4.根据权利要求3所述的溶瘤病毒，其中所述病毒基因组中E1A的内源启动子被survivin启动子所替换。

5.根据权利要求1所述的溶瘤病毒，其中所述信号肽序列为：

MDMRVPAQLLGLLLLWLPGARC（SEQ ID NO：14）；或者

MDMRVPAQLLGLLLLWFPGSRC（SEQ ID NO：16）。

6.根据权利要求1所述的溶瘤病毒，其中所述V_L的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。

7.根据权利要求1所述的溶瘤病毒，其中所述V_H的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。

8.根据权利要求1所述的溶瘤病毒，其中所述L由Ala（A）、Thr （T）、Gly（G）和/或Ser（S）构成的柔性连接序列。

9.根据权利要求8所述的溶瘤病毒，其中所述L为(Gly₄Ser)_m，其中m为1至10之间的自然数。

10.根据权利要求1所述的溶瘤病毒，其中所述L为A(EAAAK)_nA，其中n为1至9之间的自然数。

11.根据权利要求10所述的溶瘤病毒，其中所述Fc序列如SEQ ID NO：9所示。

12.根据权利要求1所述的溶瘤病毒，其中所述核酸序列与启动子可操作连接。

13.根据权利要求12所述的溶瘤病毒，其中所述启动子为CMV启动子。

14.根据权利要求1所述的溶瘤病毒，其中所述溶瘤病毒于2018年08月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：V201853。

15.权利要求1至14中任一项所述的溶瘤病毒在制备治疗增生性疾病的药物中的用途，其中所述增生性疾病是肿瘤。

16.根据权利要求15所述的用途，其中所述肿瘤是前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、肺癌、肝癌、黑色素瘤、头颈部肿瘤、淋巴癌、胃癌、食管癌、卵巢癌、膀胱癌或者肾癌。