[发明专利]用于产生具有热稳定纤维素分解活性的植物细胞壁降解酶的转基因微藻

权利要求书

1.转基因微藻的组合，其中每种转基因微藻表达细菌来源的亚磷酸脱氢酶D和选自下组的热稳定植物细胞壁降解酶：

新阿波罗栖热袍菌(Thermotoga neapolitana)的内切葡聚糖酶B(SEQ ID NR：1)、解糖热解纤维素菌(Caldicellulosiruptor saccharolyticus)的纤维体CelB的具有纤维二糖水解酶活性的部分(SEQ ID NR：3)、和强烈炽热球菌(Pyrococcus furiosus)的β-葡糖苷酶(SEQ ID NR：5)，其中所述新阿波罗栖热袍菌的内切葡聚糖酶B由具有密码子使用优化以用于叶绿体表达的核苷酸序列SEQ ID NR：2编码，所述解糖热解纤维素菌的纤维体CelB的部分由具有密码子使用优化以用于叶绿体表达的核苷酸序列SEQ ID NR：4编码，以及所述强烈炽热球菌的β-葡糖苷酶由具有密码子使用优化以用于叶绿体表达的核苷酸序列SEQ IDNR：6编码。

2.根据权利要求1所述的转基因微藻的组合，其进一步包含表达下列酶的转基因微藻：细菌来源的亚磷酸脱氢酶D、和新阿波罗栖热袍菌(Thermotoga neapolitana)的木聚糖酶XynA(SEQ ID NR：7)。

3.根据权利要求2所述的转基因微藻的组合，其中所述新阿波罗栖热袍菌的木聚糖酶XynA由具有密码子使用优化以用于叶绿体表达的核苷酸序列SEQ ID NR：8编码。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的转基因微藻的组合，其进一步包含表达下列酶的转基因微藻：

细菌来源的亚磷酸脱氢酶D、和

木质素酶，其选自嗜热栖热菌(Thermus thermophilus)的漆酶(SEQ ID NR：14)和嗜热栖热菌的多酚氧化酶(SEQ ID NR：16)。

5.根据前述权利要求中任一项所述的转基因微藻的组合，其属于莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)种。

6.根据前述权利要求中任一项所述的转基因微藻的组合，其中所述亚磷酸脱氢酶D来自施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)(SEQ ID NR：11)，并由核苷酸序列SEQ ID NR：12编码。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的转基因微藻的组合的用途，其用于在包含磷酸根离子作为唯一磷源的培养基中生产热稳定植物细胞壁降解酶的混合物。

8.一种生产热稳定植物细胞壁降解酶的混合物的方法，包括以下步骤：

a)在光生物反应器中在含有磷酸根离子作为唯一磷源的培养基中培养根据权利要求1-6中任一项所述的转基因微藻的组合；

b)将微藻冷冻干燥；

c)备选地通过超声处理、在80℃短时间加热处理、非变性条件或变性条件来提取酶。

9.能根据权利要求8的方法获得的热稳定植物细胞壁降解酶的混合物，所述混合物的特征在于，其包含：

新阿波罗栖热袍菌的内切葡聚糖酶B(SEQ ID NR：1)、

解糖热解纤维素菌的纤维体CelB的具有纤维二糖水解酶活性的部分(SEQ ID NR：3)，

强烈炽热球菌的β-葡糖苷酶(SEQ ID NR：5)，

比率为20:50:30[g株内切葡聚糖酶B：g株纤维体CelB的纤维二糖水解酶部分：g株β-葡糖苷酶]。