[发明专利]抗PTK7免疫细胞癌症疗法

权利要求书

1.一种工程化T细胞，该工程化T细胞包含编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸，其中该CAR包含特异性结合PTK7的胞外结构域。

2.如权利要求1所述的工程化T细胞，该工程化T细胞进一步包含被破坏的T细胞受体α链恒定区(TRAC)基因。

3.如权利要求1或2所述的工程化T细胞，该工程化T细胞进一步包含被破坏的β-2-微球蛋白(β2M)基因。

4.如权利要求1-3中任一项所述的工程化T细胞，其中该CAR的胞外结构域包含抗PTK7抗体。

5.如权利要求4所述的工程化T细胞，其中该抗PTK7抗体是抗PTK7单链可变片段(scFv)。

6.如权利要求5所述的工程化T细胞，其中该抗PTK7 scFv包含与参考抗体相同的重链可变结构域(VH)互补决定区(CDR)和相同的轻链可变结构域(VL)CDR，其中该参考抗体包含(i)SEQ ID NO:55所示的VH和SEQ ID NO:56所示的VL，(ii)SEQ ID NO:69所示的VH和SEQID NO:70所示的VL，(iii)SEQ ID NO:76所示的VH和SEQ ID NO:77所示的VL，或(iv)SEQ IDNO:83所示的VH和SEQ ID NO:84所示的VL。

7.如权利要求6所述的工程化T细胞，其中该抗PTK7 scFv包含与该参考抗体相同的VH和VL链。

8.如权利要求6所述的工程化T细胞，其中该抗PTK7 scFv包含SEQ ID NO:54、68、75或82中任一项的氨基酸序列。

9.如权利要求1-8中任一项所述的工程化T细胞，其中该CAR进一步包含CD28共刺激结构域或41BB共刺激结构域。

10.如权利要求9所述的工程化T细胞，其中该CAR进一步包含CD3ζ细胞质信号传导结构域。

11.如权利要求1-10中任一项所述的工程化T细胞，其中该CAR由SEQ ID NO:49、51、65、72、79或112中任一项的核苷酸序列或包含与SEQ ID NO:49、51、65、72、79或112至少90％相同的核酸序列的核苷酸序列编码。

12.如权利要求1-11中任一项所述的工程化T细胞，其中将编码该CAR的核酸插入该被破坏的TRAC基因中。

13.如权利要求2-12中任一项所述的工程化T细胞，其中该被破坏的TRAC基因包含SEQID NO:63、64、71、78或91中任一项内的编码LHA和/或RHA的核苷酸序列、SEQ ID NO:92或100的核苷酸序列、和/或SEQ ID NO:63、64、71、78或91中任一项的核苷酸序列。

14.如权利要求1-13中任一项所述的工程化T细胞，其中该被破坏的β2M基因包含至少一个选自SEQ ID NO:9-14中任一项的核苷酸序列。

15.一种工程化T细胞，该工程化T细胞包含：

(i)被破坏的TRAC基因；

(ii)被破坏的β2M基因；和

(iii)编码包含抗PTK7抗原结合片段的CAR的核酸。

16.如权利要求15所述的工程化T细胞，其中该CAR包含(a)包含抗PTK7抗原结合片段的胞外结构域，(b)CD8跨膜结构域，和(c)包含CD28共刺激结构域和CD3ζ细胞质信号传导结构域的胞内结构域。

17.如权利要求15或16所述的工程化T细胞，其中该被破坏的TRAC基因包含编码该CAR的核酸。