[发明专利]用于单核苷酸多态性的多重检测的具有多个结合基序的通用尾引物

权利要求书

1.一种在非靶核酸的存在下确定靶核酸的存在或不存在的方法，所述方法包括：

(A)提供包含或可能包含所述靶核酸和所述非靶核酸的样品；

(B)形成混合物，其包含：

i.所述样品；

ii.正向引物，其包含被配置为在扩增条件下与所述靶核酸杂交并且被配置为在所述扩增条件下不与所述非靶核酸杂交的第一区域，和被配置为在所述扩增条件下不与所述靶核酸杂交的第二区域；以及

iii.信号生成核酸探针，其中所述信号生成核酸探针当经受所述扩增条件时与所述第二区域或与之互补的区域退火；

(C)使所述混合物经受所述扩增条件，所述扩增条件适合于通过扩增反应扩增所述靶核酸，从而如果所述混合物中存在所述靶核酸，则扩增所述靶核酸，使得所述信号生成核酸探针被降解，并且生成信号；以及

(D)检测所述信号的存在或不存在，从而在所述非靶核酸的存在下确定所述靶核酸的存在或不存在。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶核酸是等位基因。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶核酸是突变序列，并且所述非靶核酸是野生型序列。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶核酸的序列与所述非靶核酸的序列有至少一个核苷酸不同。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶核酸的序列与所述非靶核酸的序列仅有一个核苷酸不同。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶核酸的序列与所述非靶核酸的序列有不超过五个核苷酸不同。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述正向引物对所述靶核酸具有特异性，并且仅选择性地扩增所述靶核酸。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述混合物不使用核酸或肽阻断剂。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述混合物进一步包含反向引物。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述正向引物被配置为与所述靶核酸的核酸序列的第一区域杂交，并且所述反向引物被配置为与所述靶核酸的核酸序列的第二区域杂交，从而被配置为在足以进行核酸扩增的条件下扩增所述核酸序列。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述第一区域包含所述核酸序列的3’端。

12.根据权利要求10所述的方法，其中所述第二区域包含所述核酸序列的5’端。

13.根据权利要求9所述的方法，其中所述反向引物包含与靶核酸和非靶核酸上的序列均互补或同源的序列。

14.根据权利要求9所述的方法，其中所述反向引物是基因座特异性引物。

15.根据权利要求9所述的方法，其中所述反向引物是通用引物。

16.根据权利要求9所述的方法，其中所述反向引物被配置为使得在所述热循环后，所述信号生成核酸探针被消化。

17.根据权利要求1所述的方法，其中所述混合物进一步包含核酸酶。

18.根据权利要求1所述的方法，其中所述扩增反应是聚合酶链反应(PCR)。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述PCR是定量聚合酶链反应(qPCR)。

20.根据权利要求1所述的方法，其中所述扩增条件包括：dNTP、盐、缓冲液或其组合。