[发明专利]用于稳定腔肠素及其类似物和衍生物的组合物和方法

说明书

本文提供用于稳定腔肠素及其类似物或衍生物以及用于改善腔肠素及其类似物和衍生物的溶解性和重构效率的组合物和方法。

相关申请的交叉引用

本申请要求2018年10月3日提交的美国临时专利申请第62/740,622号和2019年2月14日提交的美国临时专利申请第62/805,517号的优先权和权益，所述申请各自通过引用整体且出于所有目的并入本文中。

发明领域

本文提供用于稳定腔肠素及其类似物和衍生物以及用于改善腔肠素及其类似物和衍生物的溶解性和重构效率的组合物和方法。

背景技术

发光在生物测定中用作报道分子活性的量度。报道分子进而将发光测量值与诸如转录(基因表达)、翻译(蛋白质表达)、蛋白质-蛋白质相互作用等目标生物过程相联系，从而允许定量测量生物过程中发生的变化。报道分子通常是发光酶(例如，萤火虫荧光素酶、海肾荧光素酶、刺虾荧光素酶等)，当提供有其发光底物时，其导致光的产生(即发光)。

发明内容

诸如腔肠素及其类似物和衍生物的发光底物在储存(例如，在有机溶剂中储存、在较高温度下储存、在不恰当的pH下储存等)期间会分解，从而导致在添加到或用于生物测定之前底物的损失。这样的分解可能是发光底物在溶液中以温度依赖性方式随时间的不稳定性的结果。这种分解导致发光底物的浪费以及源自采用分解的发光底物的生物测定的发光测量的灵敏度和再现性降低。这种分解的产物也抑制发光反应。另外，一些腔肠素在不同的测定缓冲液中或直接进入的测试样品中具有低溶解度，或者在不同的测定缓冲液中可能表现出不一致的重构。虽然腔肠素可在稀释到适当的缓冲溶液中之前溶解在有机溶剂中，但是腔肠素化合物的有机溶液可能在储存中遭受不稳定性(热不稳定性和光不稳定性两种)。然而，尽管固体腔肠素和腔肠素类似物和衍生物(例如，呋瑞吗嗪(furimazine))比其有机溶液显著更稳定，但它们表现出极差的重构速度和效率，溶解不一致，并且难以直接用于测定和其他方法中，尤其是当需要非有机溶剂时。这些缺点极大地限制了已开发出腔肠素及其类似物和衍生物的应用的数量和类型。

因此，需要用于稳定发光底物、改善发光底物的溶解性和/或增加发光底物的重构效率的新组合物和/或方法。特别地，具有改善的物理特性和/或溶解性的底物对于长期储存(例如，在室温下≥12个月)、对一种或多种测定形式的相容性、稳健性和用户友好性是有益的。

本文提供用于稳定和改善诸如腔肠素或其类似物或衍生物的发光底物的溶解性和/或重构效率的组合物和方法。使用HPLC、吸光度和质谱分析执行不同固体组合物、制剂和形式内底物的化学完整性和/或重构效率的表征。通过在酶存在下经由相对光单位(RLU)监测生物发光执行在测定相关条件下底物的额外功能表征。

本文提供包含选自腔肠素及其类似物或衍生物的化合物和聚合物的组合物。在一些实施方案中，所述化合物选自腔肠素、腔肠素-h、腔肠素-h-h、呋瑞吗嗪、JRW-0238、JRW-1743和JRW-1744。在一些实施方案中，所述化合物为呋瑞吗嗪。在一些实施方案中，所述化合物为JRW-0238。在一些实施方案中，所述化合物为JRW-1743。在一些实施方案中，所述化合物为JRW-1744。

在一些实施方案中，所述聚合物为天然存在的生物聚合物。在一些实施方案中，所述天然存在的生物聚合物选自普鲁兰多糖、海藻糖、麦芽糖、纤维素、右旋糖酐及其任意组合。在一些实施方案中，所述天然存在的生物聚合物为普鲁兰多糖。在一些实施方案中，所述聚合物为环状糖聚合物或其衍生物。在一些实施方案中，所述聚合物为羟丙基β-环糊精。在一些实施方案中，所述聚合物为合成聚合物。在一些实施方案中，所述合成聚合物选自聚苯乙烯、聚(甲基)丙烯酸酯及其任意组合。在一些实施方案中，所述合成聚合物为包含至少一种聚(氧丙烯)嵌段和至少一种聚(氧乙烯)嵌段的嵌段共聚物。在一些实施方案中，所述合成聚合物为泊洛沙姆。