[发明专利]胰岛素产生细胞的制造方法和组合物

说明书

本发明以提供一种能够高效地进行从体细胞向胰岛素产生细胞的直接转换或诱导的、新的制造方法为主要课题。作为本发明，例如，可以举出一种胰岛素产生细胞的制造方法，其是通过从体细胞直接分化诱导而制造胰岛素产生细胞的方法，其包含以无血清的分化诱导用培养基培养体细胞的工序；或包含使分化诱导用培养基中含有5μg/mL以上的胰岛素而培养体细胞的工序。根据本发明，能够从体细胞直接高效地制造胰岛素分泌能力高的胰岛素产生细胞。通过本发明得到的胰岛素产生细胞在再生医疗等中是有用的。

技术领域

(关连申请的相互参照)

此申请是主张于2018年11月14日向日本专利厅申请的日本申请编号第2018-213449号的优先权的申请。该日本申请，其全部申请文件(说明书、权利要求的范围、附图、摘要)以明示的形式，作为本说明书全部的目的参照而引用于本说明书。

本发明属于再生医疗的技术领域。本发明涉及：在该技术领域中，通过低分子化合物从体细胞直接制造胰岛素产生细胞的方法，以及涉及的制造方法所制造的低分子化合物诱导性胰岛素产生细胞(ciIPCs：chemical compound-induced Insulin-producingcells)。本发明进一步涉及可用于制造该胰岛素产生细胞的方法的诱导用培养基组合物。

背景技术

近年，对于不进行基因导入，而通过低分子化合物将成纤维细胞这样的体细胞直接转换为其他的细胞的方法(直接重编程：Direct Reprogramming)进行的研究正广泛地展开。例如，在专利文献1中，将ALK5抑制剂、ALK6抑制剂等几种低分子化合物组合，并在其存在下培养体细胞，特别是人类成纤维细胞，其后将该细胞直接诱导为褐色脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、神经系统细胞或心肌细胞。如专利文献1的发明，如果能将常见的成纤维细胞，通过容易获得的低分子化合物直接诱导为褐色脂肪细胞等的细胞，这是非常有益的。例如，由于能从自身的成纤维细胞简便地制作自身的其他细胞，因此其在再生医疗方面的应用能够扩大。另外，也能够容易地制作作为用于新医药品开发的实验材料的细胞。

关于分泌胰岛素的胰脏β细胞，除了从iPS细胞或ES细胞分化诱导为人类胰腺β细胞的报道之外，也有从胰腺α细胞、胰腺腺泡细胞、胰腺导管腺细胞、小肠隐窝细胞、肝细胞、胆管细胞之类的内胚叶类细胞，使用胰腺β细胞特异性转录因子Pdx1、Ngn3以及MafA，直接诱导为胰腺β细胞的报道(非专利文献1)。另外，还有从小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)或人类皮肤成纤维细胞，使用山中4因子等，直接诱导为胰腺β细胞的报道(非专利文献2、3)。甚至还有从小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)，通过低分子化合物，制作内胚叶祖细胞，再从该细胞分化为胰脏内分泌细胞的报告(非专利文献4)。

如上所述的从体细胞向胰腺β细胞等的分化诱导，必定是通过在含有其他各种各样的化合物或营养素等的培养基中培养而进行。作为该培养基，例如，可以举出一般的培养基MEM(最小必需培养基)、DMEM(Dulbecco's Mod ified Eagle Medium)、DMEM/F12或对它们进行了调整的培养基，这些都有市售。并且，通常这些培养基，在考虑要诱导的细胞后，适当地添加适宜的成分(血清、蛋白质、氨基酸、糖类、维生素类、脂肪酸类、抗生物质等)而进行细胞的分化诱导。

现有技术文献

专利文献

[专利文献1]国际公开第2018/062269号

非专利文献

[非专利文献1]Current Pathobiology Reports，2016年，3卷，57-65页

[非专利文献2]Cell Stem Cell，2014年，14卷，228-236页

[非专利文献3]Nature Communications，2016年，7卷，10080页