[发明专利]改善的丝状真菌宿主细胞

说明书

本发明涉及一种分离的变体Ire1多肽，其包含(a)SEQ ID NO:2的里氏木霉Ire1多肽中位置153处的氨基酸取代；或(b)与SEQ IDNO:2的里氏木霉Ire1中位置153相对应的位置处的氨基酸取代，并且与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少70％但小于100％的序列同一性。本发明还涉及一种包含编码该变体Ire1多肽的突变ire1基因以产生分泌的异源目的多肽的重组丝状真菌宿主细胞、一种用于产生重组丝状真菌宿主细胞中分泌的异源目的多肽的方法、和一种改善重组丝状真菌宿主细胞中分泌的异源目的多肽的生产力或产率的方法。

序列表的引用

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发明背景

技术领域

本发明涉及一种丝状真菌宿主细胞，其包含改善目的多肽的生产力和/或产率的变体Ire1多肽。

背景技术

丝状真菌可用作宿主细胞，用于重组产生具有生物活性的异源多肽，例如酶和其他有价值的蛋白质。在工业和商业目的中，此类丝状真菌宿主细胞的蛋白生产力是生产成本的重要因素。

未折叠蛋白应答信号转导物Ire1p促进酵母中异源蛋白的分泌(Howard等人1995,J.Cell.Biochem.Suppl.[细胞生物化学杂志增刊]第19B卷,第209页)。Ire1p是所有真核生物中的内质网(ER)应激传感器，且催化酵母中hac1 mRNA、植物中bZIP60和后生动物中xbp1的剪接。Hac1及其直系同源物充当用于转录未折叠蛋白应答(UPR)相关基因的转录激活子，这些基因不仅在有效表达内源蛋白中起重要作用，还在有效表达外源或重组蛋白中起重要作用。

WO 2018/015443披露了一种突变黑曲霉ireA基因，其编码在位置81和84处包含氨基酸取代的变体IreA多肽。

在本领域中存在对增加丝状真菌宿主细胞中异源蛋白分泌的替代品的需求。

本发明提供了一种变体Ire1多肽，其提高丝状真菌宿主细胞分泌的异源目的多肽的生产力和/或产率。

发明内容

本发明涉及一种分离的变体Ire1多肽，其包含(a)SEQ ID NO:2的里氏木霉Ire1多肽中位置153处的氨基酸取代；或(b)与SEQ ID NO:2的里氏木霉Ire1中位置153相对应的位置处的氨基酸取代，并且与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少70％但小于100％的序列同一性。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，其包含编码变体Ire1多肽的突变ire1基因，其中(a)该变体Ire1多肽包含SEQ ID NO:2的里氏木霉Ire1多肽中位置153处的氨基酸取代；或(b)该变体Ire1多肽包含与SEQ ID NO:2的里氏木霉Ire1中位置153相对应的位置处的氨基酸取代，并且与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少70％但小于100％的序列同一性。

本发明还涉及一种重组丝状真菌宿主细胞，其包含和表达编码异源目的多肽的第一多核苷酸和包含编码变体Ire1多肽的突变ire1基因的第二多核苷酸，其中(a)该变体Ire1多肽包含SEQ ID NO:2的里氏木霉Ire1多肽中位置153处的氨基酸取代；或(b)该变体Ire1多肽包含与SEQ ID NO:2的里氏木霉Ire1中位置153相对应的位置处的氨基酸取代，并且与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少70％但小于100％的序列同一性。

本发明还涉及一种产生分泌的异源目的多肽的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)在适于产生和分泌该异源多肽的条件下，培养这种重组丝状真菌宿主细胞；以及，任选地

(b)回收该分泌的异源目的多肽。

本发明进一步涉及一种改善丝状真菌宿主细胞中分泌的异源目的多肽的生产力或产率的方法，所述方法包括以下步骤：