[发明专利]单核细胞源性NK细胞

说明书

公开了从全血单核细胞制备脐带血或外周血NK细胞，不需要分离CD34+造血干细胞或NK细胞也不需要饲养层。有利地，本文提出的方法使用富集方法，所述富集方法使用抗CD16激动剂抗体、抗CD3抗体和N‑803。此外，所预期的方法适合于适应成完全自动化的生产方法(盒中GMP)。

技术领域

本公开涉及产生和培养免疫感受态细胞的组合物、方法和装置，特别是本公开涉及来自全血的脐带血(CB)或外周血(PB)NK细胞。

背景技术

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自然杀伤(NK)细胞是一组先天免疫细胞，其常表现为细胞毒性淋巴细胞，所述细胞毒性淋巴细胞通过靶向释放颗粒溶素和穿孔素表现出抗体依赖性细胞毒性。大多数NK细胞具有特异性的细胞表面标记谱(例如，CD3^-、CD56⁺、CD16⁺、CD57⁺、CD8⁺)以及各种活化性和抑制性受体的集合。尽管最近NK细胞已经成为某些癌症治疗的重要组成部分，但由于全血中NK细胞的比例相对较低，产生大量NK细胞(尤其是自体NK细胞)一直是显著的障碍。

为了获得治疗上有意义数量的NK细胞和NK样细胞，可以从各种前体细胞产生NK细胞。例如，各种干细胞因子(SCF)、FLT3配体、白细胞介素(IL)-2、IL-7和IL-15已经在各种体外诱导和扩增脐带血源性细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞的方法中被报道(AnticancerResearch[抗癌研究]30:3493-3500(2010))。类似地，CD34⁺造血细胞可以暴露于IL-12和其他药剂，如US 2018/0044636中所报道的。在其他方法中，人成血管细胞顺序暴露于两种不同的细胞因子混合物，如WO 2011/068896中所述，并且不同的细胞因子混合物与胚胎后造血干细胞一起使用，如WO 2012/128622中所教导的。尽管这些方法中的至少一些提供了NK细胞的显著n倍扩增，但用于这种扩增的方法和试剂既需要时间又需要资源。此外，应当指出，许多已知的方法还需要在饲养细胞层上培养NK细胞，这从技术和监管角度来看常常是有问题的。

在更简单的方法中，急性髓系白血病(AML)细胞可以暴露于TpoR激动剂，从而诱导AML细胞形成NK细胞。然而，这种方法作为治疗性细胞制剂的来源可能是不可行的。替代方法还依赖于在各种白细胞介素、干细胞因子和FLT3配体存在下培养外周血细胞，如WO2011/103882中公开的。在另一种方法中，US 2013/0295671教导了用抗CD16和抗CD3抗体以及细胞因子刺激已经存在的NK细胞的方法。虽然在程序上更简单，但这样的方法仍然需要对细胞进行精细的操作，并且由于所需的特定试剂而大大增加了成本。

在进一步已知的方法中，US 10,125,351描述了使用脐带血或外周血作为细胞来源，所述细胞进行密度梯度分离以分离有核细胞，然后用含有干扰素、白细胞介素、CD3抗体和人白蛋白的培养基培养所述有核细胞。最有利的是，这样的方法适于在生物反应器中进行灌注培养，因此显著降低了操作困难。然而不幸的是，NK细胞的产量相对较低。

因此，即使本领域已知产生大量NK细胞的各种方法，但所有或几乎所有的方法都存在各种缺点。因此，需要提供生产大量NK细胞，特别是自体NK细胞的改进的系统和方法。此外，改进的系统和方法还将允许细胞培养的自动化，并将具有显著减少的试剂需求，以使这种方法在临床上和商业上可行。

发明内容