[发明专利]使用具有完全或部分缺失的whiB4基因的物种谷氨酸棒杆菌的L-赖氨酸分泌细菌发酵生产L-赖氨酸的方法

说明书

本发明基本上涉及一种使用具有完全或部分缺失的whiB4基因的物种谷氨酸棒杆菌的L‑赖氨酸分泌细菌发酵生产L‑赖氨酸的方法。

L-赖氨酸用于人类医学、制药工业、食品工业、以及特别用于动物营养。

L-赖氨酸是通过物种谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)菌株的发酵产生的。由于经济上的重要性，正在不断进行改善生产方法的工作。改善可能涉及发酵技术，例如搅拌和供应氧气，或涉及营养培养基的组合物，例如发酵过程中的糖浓度，或涉及将发酵液通过例如干燥和造粒发酵液或离子交换色谱加工成合适的产品形式，或者可能涉及微生物本身的固有性能特性。

用于改善这些微生物的性能特性的方法是那些诱变、选择和筛选突变体的方法。多年来，通过修饰(即增强或减弱)单个涉及L-赖氨酸生物合成的基因并研究对L-赖氨酸生产的影响，重组DNA技术的方法同样用于改善物种谷氨酸棒杆菌的产L-赖氨酸菌株。

已经分别公开了各种细菌或物种谷氨酸棒杆菌菌株的染色体的核苷酸序列，以及它们的分析。该信息可在公共可访问的数据库中获得，并可用于菌株开发目的。一个这样的数据库是NCBI(National Center for Biotechnology Information，U.S.NationalLibrary of Medicine 8600Rockville Pike，Bethesda MD，20894USA)的GenBank数据库。

在针对生物体测序的染色体注释过程期间，通过向数据库提供信息的提供者，向鉴定的结构例如基因或编码序列提供称为locus_tag的唯一标识符。

谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)ATCC13032染色体的核苷酸序列及其分析由Ikeda and Nakagawa(Applied Microbiology and Biotechnology 62,99-109(2003))描述并在EP1108790中描述。该信息可在NCBI以登录号NC_003450获得。在以登录号NC_003450公开的染色体序列中，locus_tag NCgl0275标识了编码调节蛋白的核苷酸序列。还注释了该蛋白与转录因子WhiB相似。多肽的氨基酸序列以标识符NP_599532可得。

在EP1108790中，在序列311下公开了编码序列。在SEQ ID NO:3811下公开了相应的氨基酸序列。

locus_tag NCgl0275的核苷酸序列和EP1108790的序列311是相同的。

Kalinowski等人独立地描述了谷氨酸棒杆菌ATCC13032染色体的核苷酸序列及其分析(Journal of Biotechnology 104(1-3),5-25(2003))。该信息可在NCBI以登录号NC_006958获得。Locus_tag CGTRNA_RS01480标识了编码描述为WhiB家族转录调节因子的基因产物的核苷酸序列。本领域中也使用了old_locus_tag名称cg0337。多肽的氨基酸序列以标识符WP_003863319可得。

locus_tag NCgl0275和CGTRNA_RS01480的核苷酸序列是相同的。

有关由old_locus_tag cg0337标识的基因的转录信号的信息，可参见Pfeifer-Sancar等人(BMC Genomics 14:888(2013))。

Choi等人鉴定出NCgl0275基因产物为谷氨酸棒杆菌的WhiB样蛋白，并将该基因命名为whcA(FEMS Microbiology Letters 290,32-38(2009))。Choi等人表明，whcA基因在谷氨酸棒杆菌的氧化应激反应中起负面作用。在这些研究期间，Choi等人在菌株AS019E12的whcA基因内构建了一个缺失。菌株AS019E12源自ATCC13059(参见：Follettie et al.；Journal of Bacteriology 175(13),4096-4103(1993))。