[发明专利]包含修饰的MHCII类DRα1结构域的重组多肽及其应用方法

说明书

本发明提供了包含修饰的DRα1结构域的重组多肽。在一些实施方案中，所述多肽包括修饰的DRα1结构域、抗原性肽和任选包括接头序列。本发明还提供了包含所述重组多肽的药物组合物，使用所述重组多肽或药物组合物治疗炎性疾病的方法，以及包含编码所述重组多肽的核酸的表达构建体。

相关申请的交叉参考

本申请要求2019年10月5日提交的美国临时申请号62/741,941的权益，所述专利申请以其全部内容并入本文作参考。

发明领域

本发明揭示涉及重组治疗蛋白，特别是修饰的部分MHC分子，及其在炎性疾病治疗中的应用。

致谢政府支持

本发明是在国立卫生研究院授予的基金号R42AI122574和退伍军人事务部授予的基金号5I01 BX000226-10和1IK6BX004209的政府支持下完成的。政府拥有本发明的某些权利。

发明背景

多发性硬化症(MS)是最普遍的中枢神经系统白质和灰质的慢性炎性疾病，在全球范围内影响超过200万人，在美国影响至少40万人(GBD 2015Neurological DisordersCollaborator Group,Lancet Neurol.16:877-897,2017)。MS的炎症过程是由自身免疫驱动的脱髓鞘作用介导的，通常伴随神经退行性损伤。目前尚无法治愈MS。因此，MS患者必须依靠疾病修饰治疗来改善某些疾病征象(Wingerchuk et al.,Mayo Clin.Proc.89:225-240,2014)。有大约15种疾病缓解药物可用于复发缓解型MS(Reich et al.,N.Engl.J.Med.378:169-180,2018)。然而，持续需要改良的MS疗法。

发明概述

本发明揭示了修饰的主要组织相容性(MHC)II类DRα1多肽。这些修饰的DRα1多肽表现出对CD74的改变的亲和性并与巨噬细胞移动抑制因子(MIF)竞争结合CD74的能力，而对分子的结构没有明显影响。

在一些实施方案中，揭示了重组多肽，其包括在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置14的位置处包含谷氨酰胺残基的MHC II类DRα1结构域(在某些情况下称为L14Q突变，或者在DRα1-MOG-35-55构建体语境中称作L50Q)。谷氨酰胺残基置换在这个位置的天然亮氨酸残基(图1)。在一些实例中，DRα1结构域是人DRα1结构域。在一些实例中，重组DRα1结构域的序列包括SEQ ID NO:1的氨基酸序列或由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成。

在其它实施方案中，揭示了重组多肽，其包括在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置14的位置处包含谷氨酰胺残基的DRα1结构域、抗原性肽和任选包括接头序列。在一个实例中，所述接头序列包括第一甘氨酸-丝氨酸间隔子、凝血酶切割位点和第二甘氨酸-丝氨酸间隔子。抗原性肽可以是髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)多肽，例如人或小鼠MOG-35-55。在一些实施方案中，所述重组多肽的序列包括SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的氨基酸序列或由SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的氨基酸序列组成。

本发明还提供了编码本文揭示的重组多肽的核酸分子。示例的核酸分子包括SEQID NO:4-6。在一些实施方案中，所述核酸包括在表达构建体和/或载体中。本发明还揭示了包括所述表达构建体或载体的细胞或细胞系。

在一些实施方案中，本发明揭示的重组多肽或编码所述重组多肽的核酸例如与药学上可接受的载体一起包括在药物组合物中。在一些实例中，所述组合物包括至少5mg/kg的所述重组多肽。

本发明进一步揭示了治疗炎性病症的方法，包括给患有所述炎性病症的对象施用本发明揭示的重组多肽或药物组合物(如包括SEQ ID NO:1-3任一多肽的组合物)。在一些实例中，所述对象患有多发性硬化症(或其小鼠模型，EAE)。