[发明专利]免疫细胞的分析方法及细胞分析装置

说明书

本发明涉及免疫细胞的分析方法，其包括：将含免疫细胞的全血和免疫刺激因子在体外混合，对免疫细胞的目标分子进行标记的工序，及通过检测标记，取得免疫细胞中的目标分子的定位相关信息的工序。另外，本发明涉及通过将含免疫细胞的全血和免疫刺激因子在体外混合，在免疫细胞中生成目标分子的定位而对得到的细胞进行分析的装置。

【技术领域】

本发明涉及免疫细胞的分析方法及细胞分析装置。

【背景技术】

免疫细胞是在生物体的免疫系发挥中心的作用的细胞。免疫细胞还与癌、自身免疫疾病等的各种疾病关联，在这些疾病中，知晓调节免疫细胞的活性或功能的治疗法。例如，在癌的领域中，关注施用免疫检查点抑制剂而活化由癌细胞抑制的T细胞的治疗法。在自身免疫疾病的领域中，由免疫抑制剂的施用进行抑制成为疾病的原因的免疫细胞的功能的治疗法。在这些疾病中，为了进行治疗方针的决定及治疗效果的监测，正确地掌握患者的免疫细胞的活性、特别免疫细胞的刺激应答性的重要性升高。

近年，作为免疫细胞的刺激应答性的指标之一，关注测定免疫突触(immunological synapse：IS)。IS是在免疫细胞与目标细胞接触之时，在该接触面在免疫细胞形成的结构体。知晓IS形成能与免疫细胞的细胞因子分泌能相关。IS的形成在免疫细胞和目标细胞的接触后在数分钟至数十分钟发生，被看作是免疫细胞的活化初期的重要的过程。

知晓由免疫细胞和免疫刺激因子及异物的接触，在免疫细胞形成与IS同样的结构体。在专利文献1中记载了向固定化抗CD3抗体的板接种从末梢血单核细胞(PBMC)调制的T细胞克隆，通过添加抗CD28抗体，进行由抗体的刺激及与板底面的接触的结果，在T细胞克隆上发生CD3分子及CD28分子的定位。在专利文献1中，将在T细胞克隆上发生的目标分子(CD3及CD28)的定位检测为相当于IS的结构体。具体而言，通过将从板回收的T细胞克隆用与CD3及CD28结合的荧光标记抗体免疫染色而用流式细胞仪测定，评价检测细胞上的CD3分子及CD28分子的定位，免疫细胞的免疫刺激应答性。

【现有技术文献】

【专利文献】

专利文献1：美国专利申请公开第2018/0292385号说明书

【发明的概要】

【发明要解决的课题】

在记载在专利文献1的方法中，测定到如从PBMC调制的T细胞克隆一样的单离的免疫细胞。在由此方法进行受试者的免疫细胞的分析时，例如，以从受试者采集的血液中所含的免疫细胞作为分析对象。但是，血液中的血细胞成分的明细是红细胞占90％以上，白细胞等的免疫细胞是数％。这样，由于在血液中红细胞与免疫细胞相比压倒性地多，有免疫细胞以外的血细胞影响免疫细胞的IS形成的担忧。为了排除这样的影响，有预先从血液分离及单离免疫细胞的必要。

但是，从血液等的生物体试样分离及单离免疫细胞的作业烦琐且耗时间。另外，由作业者在免疫细胞的回收率上发生偏差。再者，由于由在免疫细胞的分离及单离中使用的试剂及离心分离等的物理的处理损伤免疫细胞而免疫细胞的质及功能可降低，有无法正确地测定免疫细胞的活性的担忧。因此，需求不要求从生物体试样分离及单离免疫细胞的工序的免疫细胞的分析方法。

【用于解决课题的手段】

本发明人通过向从受试者采集的全血添加免疫刺激因子，在全血中刺激免疫细胞而确认是否形成了目标分子的定位。于是，本发明人令人惊讶地发现，即使在全血中刺激免疫细胞时，在免疫细胞中也形成了目标分子的定位，可对其进行检测。

本发明的一实施方式提供免疫细胞的分析方法，其包括：将含免疫细胞的全血和免疫刺激因子在体外混合，对免疫细胞的目标分子进行标记的工序，通过检测标记，取得免疫细胞中的目标分子的定位相关信息的工序。