[发明专利]用于针对髓源性抑制细胞的靶向治疗的细胞外囊泡

说明书

本文公开了负载有治疗性货物的MDSC靶向的细胞外囊泡(EV)，以及其组合物、系统和制备方法。本文还公开了MDSC靶向配体，诸如含有MDSC靶向部分的融合蛋白。还公开了含有所公开的融合蛋白的EV。在一些实施方案中，EV还负载有治疗性货物。还公开了经工程改造以生产所公开的EV的EV生产细胞。还公开了制备所公开的EV的方法，所述方法涉及在适于生产EV的条件下培养所公开的EV生产细胞。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2018年10月19日提交的美国临时申请第62/747,982号的权益，此临时申请在此通过引用整体并入本文中。

序列表

本申请含有以电子形式提交的序列表，其为于2019年10月16日创建的名称为“321501-2360Sequence Listing_ST25”的ASCII.txt文件。此序列表的内容整体并入本文中。

背景技术

髓源性抑制细胞(MDSC)在许多生理和病理过程(包括癌症、伤口愈合和组织修复)中发挥基础性作用。例如，MDSC通过使肿瘤细胞屏蔽宿主的免疫系统和/或抗癌治疗，并通过促进肿瘤细胞的散布/扩散来实现肿瘤/癌症进展。因此，需要开发治疗方法以选择性地靶向MDSC并调节其活性。

发明内容

本文公开了有效靶向MDSC并递送治疗性货物的纳米载体系统。这些纳米载体基于设计的细胞外囊泡(EV)，其本质上可以是自体的(即，来源于同一患者的细胞)或同种异体的(即，来源于供体的细胞)。细胞天然地生产EV。然而，为了避免免疫应答，可以使用来自免疫系统的细胞，诸如抗原呈递细胞(例如，树突状细胞)或巨噬细胞。

所公开的装饰有ICAM的EV可被用在许多不同病状(诸如癌症和自身免疫性疾病)中来靶向骨髓细胞。在一些实施方案中，可以通过将ICAM表达载体转染到“供体”细胞或组织中来实现装饰。另选地，可以使用本来就具有高水平ICAM表达的供体细胞和组织。

因此，可以使用不同的转染技术(例如，批量电穿孔、纳米电穿孔、组织纳米转染、病毒转染、声致穿孔、纳米粒子、微粒、化学转染)，在转染体外细胞或体内组织后获得设计的EV。可以通过用例如编码ICAM1的质粒DNA转染细胞来实现负载治疗性货物和/或用MDSC靶向配体装饰。基于ICAM1的靶向容许在数分钟内选择性地将EV/货物递送至MDSC。

这些EV被收集后可以经由电穿孔(为了添加更多的货物)、生化或化学功能化以包括造影剂(用于诊断)或其他靶向或示踪蛋白/元素来进一步修饰。EV还可以用可透过脂质的药物/化学物质(例如，为了添加药理剂以及遗传性货物)来进一步修饰，所述药物/化学物质能够经由浓度梯度进入EV来进一步修饰货物。

可以根据要增强还是削弱骨髓抑制子活性来改变治疗性货物，这取决于所治疗的病状。例如，使装饰有ICAM1的EV负载miR146a可以例如用来抵抗肿瘤龛位内的MDSC活性。除了基于核酸的治疗性货物外，装饰有ICAM1的EV还可以负载有可透过膜的药理化合物(例如，依鲁替尼(Ibrutinib))，这些化合物可以经由浓度梯度扩散到EV中。在一些实施方案中，货物是用于诊断成像的显像剂，诸如造影剂。

在下面的附图和描述中阐述了本发明的一个或多个实施方案的细节。根据说明书和附图以及权利要求，本发明的其他特征、目标和优点将是显而易见的。

附图说明

图1是生产靶向MDSC的装饰有ICAM1的EV的示意图。EV是如下制得：将编码ICAM1的质粒和编码治疗性货物(基于核酸的治疗剂)的质粒递送入自体或同种异体细胞(体外或体内)。细胞机器加工这些质粒，从而能够生产装饰有ICAM1并负载有目标核酸的设计的EV。

图2是负载有药物治疗性货物(例如，依鲁替尼，一种抑制布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)的可透过膜的药理化合物)的表面装饰的EV的示意图。