[发明专利]对细胞的检测和分析

权利要求书

1.一种用于检测微生物的方法，所述方法包括：

在不超过45摄氏度的情况下将样品与对微生物的物种的靶核酸具有特异性的探针一起温育；

将所述样品中的完整细胞与未经结合的探针分离；以及

检测在所述完整细胞内结合的探针以示出所述样品中的所述物种的存在。

2.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括直接从所述样品执行抗微生物剂敏感性测试。

3.根据权利要求2所述的方法，其中执行抗微生物剂敏感性测试包括差异生长、透化、杂交和磁性标记。

4.根据权利要求3所述的方法，其中透化、杂交和磁性标记是协同的。

5.根据权利要求2所述的方法，其中在单个盒中执行抗微生物剂敏感性。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法进一步包括使用FISH检测、定量和鉴定靶微生物。

7.根据权利要求6所述的方法，其进一步包括执行表型抗微生物剂敏感性测试。

8.根据权利要求6所述的方法，其进一步包括在少于约90分钟内检测和定量靶微生物。

9.根据权利要求8所述的方法，其进一步包括在少于约60分钟内检测和定量靶微生物。

10.根据权利要求9所述的方法，其进一步包括在少于约30分钟内检测和定量靶微生物。

11.根据权利要求1所述的方法，其中在所有步骤中，所述样品维持在约40摄氏度或约40摄氏度之下。

12.根据权利要求1所述的方法，其中：

所述探针包括荧光标记的寡核苷酸，所述荧光标记的寡核苷酸与所述物种的核糖体RNA互补；

所述温育步骤进一步包含将所述细胞暴露于与细菌细胞表面结合的磁性颗粒；

所述分离步骤包含使用磁场拉动结合磁性颗粒的细胞穿过染料垫并到达成像表面上，同时所述染料垫保持未经结合的标记远离所述成像表面；

所述检测步骤包括对所述成像表面进行非放大成像以捕获单细胞图像；并且

所述步骤全部在介于约36摄氏度与39摄氏度之间的温度下执行。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述温育步骤包含将所述细胞暴露于使所述细胞透化的试剂，从而允许所述探针进入所述细胞并与其中的靶标结合。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述探针包括与微生物RNA互补的寡核苷酸。

15.根据权利要求13所述的方法，其中：所述试剂包含一种或多种去垢剂；所述探针包括寡核苷酸；并且所述靶核酸是微生物核糖体RNA。

16.根据权利要求15所述的方法，其中：所述去垢剂包含CHAPSO和SB3-12中的一种或多种；并且所述探针包含荧光标记的寡核苷酸，所述荧光标记的寡核苷酸与微生物核糖体RNA的部分互补。

17.根据权利要求1所述的方法，其中所述探针包含：荧光标记的寡核苷酸，所述荧光标记的寡核苷酸与对所述物种具有特异性的核糖体RNA的一段互补。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述探针进一步包含一个或多个辅助探针，所述一个或多个辅助探针是在距离所述荧光标记的寡核苷酸所结合的所述段1个到30个碱基内的定位处与所述核糖体RNA结合的寡核苷酸。