[发明专利]T细胞或NK细胞的制造方法、T细胞或NK细胞的培养用培养基、T细胞或NK细胞的培养方法、维持未分化T细胞的未分化状态的方法和T细胞或NK细胞的增殖促进剂

说明书

本发明的目的在于，提供能够使T细胞或NK细胞高效地增殖并且维持该细胞的状态(例如未分化性)的T细胞或NK细胞的制造方法、T细胞或NK细胞的培养用培养基、T细胞或NK细胞的培养方法、维持未分化T细胞的未分化状态的方法和T细胞或NK细胞的增殖促进剂。本发明涉及T细胞或NK细胞的制造方法等，其包括如下步骤：在含有式(X‑1)或式(X‑2)所示的双苄基异喹啉生物碱或者其中的1个醚键断裂后的化合物或其药学上可接受的盐的培养基中培养T细胞或NK细胞。

技术领域

本发明涉及T细胞或NK细胞的制造方法、T细胞或NK细胞的培养用培养基、T细胞或NK细胞的培养方法、维持未分化T细胞的未分化状态的方法和T细胞或NK细胞的增殖促进剂。

背景技术

T细胞为源自造血干细胞的免疫细胞之一。T细胞在细胞表面表达T细胞受体(TCR)，特异性识别靶细胞上的HLA-肽复合物。另外，T细胞能够通过TCR介导的增殖信号进行增殖。T细胞大致分为辅助性T细胞(Th细胞)和细胞毒性T细胞(CTL)，在体内协同工作。

对肿瘤的免疫应答(抗肿瘤免疫应答)主要由直接杀伤肿瘤的CTL和增强CTL的功能的Th细胞构成。另一方面认为，树突状细胞(DC)具有作为调整其它免疫细胞的动态的指挥官的作用，Th细胞通过DC的活化而活化CTL，从而发挥抗肿瘤效果。

在使用抗肿瘤免疫应答的癌症治疗方法中，使用作为效应细胞起作用的、肿瘤相关抗原特异性CTL等的过继免疫疗法是也发挥使原发癌缩小、抑制转移或复发的效果且对正常组织的副作用小的治疗方法。

认为在过继免疫疗法中，由诱导性多能干(iPS)细胞等多能干细胞诱导的T细胞也与通过将该T细胞给药于生物体内而引起强烈的抗肿瘤免疫应答的细胞免疫疗法有关，并对此进行了开发(专利文献1、非专利文献1)。例如，专利文献1和非专利文献1中记载的方法为由抗原特异性CD8阳性CTL制作iPS细胞、再分化诱导为CD8阳性CTL的方法。

由多能干细胞诱导的T细胞与在生物体内的持续性高低和应答相关(非专利文献3)，T细胞的未分化状态越高，显示出越高的治疗效果(非专利文献4)。

但是，在由多能干细胞诱导的T细胞的培养中，通常使用源自健康人供体等的细胞作为饲养细胞，担心未知成分以未知浓度混入，存在感染的风险或成本的问题，已成为临床应用中的课题(非专利文献2)。

自然杀伤(NK)细胞占血细胞的约10％左右，是在免疫反应中发挥重要作用的淋巴样细胞之一。NK细胞可发挥各种功能，特别是具有杀伤癌细胞或者杀伤被从外部入侵的病原菌或病毒感染的细胞等的能力，发挥清除肿瘤化或肿瘤化过程中的异常细胞的作用。

另外，NK细胞还作为抗体药物识别肿瘤细胞等、在患者体内发挥抗体依赖性细胞毒活性时的效应细胞而发挥功能。NK细胞与T细胞同样地能够通过导入嵌合抗原受体(CAR)或TCR而被赋予特异性、对癌细胞等显示出特异性的细胞毒活性(非专利文献5)。

尽管如上所述NK细胞有可能作为癌症或感染性疾病的治疗剂，但是存在于患者体内的NK细胞数并不多。因此，需要可以在使NK细胞保持能够用于治疗用途程度的充分的疗效的同时还可以大量生产NK细胞的技术。

但是，与T细胞相比，NK细胞不能在体外大量增殖和培养，因此，对用于将NK细胞增殖和培养至对治疗有用的水平的技术进行了很多研究。

例如，关于NK细胞的培养，已经进行了不仅使用用于T细胞增殖/活化的IL-2、而且使用对IL-21、LPS(非专利文献6)或CD3进行刺激的OKT-3抗体(非专利文献7)的增殖或活化方法的研究。但是，这些仅仅是在以往所使用的IL-2的使用的变形和改进方式中发现了新的增殖物质。

另外，还开发了组合有IL-12、IL-15或IL-18的NK细胞培养方法(非专利文献8)。另外，还开发了在NK细胞的培养中使用自体或同种的饲养细胞的方法。