[发明专利]用于治疗糖原贮积病的方法和组合物

说明书

本发明提供了多种新颖腺相关病毒(AAV)载体，用于治疗Ia型糖原贮积病(GSD‑Ia)的基因疗法应用。本文披露了许多掺入有经修饰的G6PC启动子/增强子序列的重组核酸分子、载体和重组AAV。当从各种宿主细胞平台表达时，使用所述经修饰的G6PC启动子/增强子序列导致增强的AAV产量和质量。本文还提供包含本发明的新颖AAV的组合物和使用所述组合物治疗GSD‑Ia的方法。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2018年12月18日提交的美国临时专利申请号62/781,380的权益和优先权，其披露内容出于所有目的通过引用整体并入本文。

序列表

本申请包含序列表，所述序列表已以ASCII格式电子提交，并通过引用整体并入本文。所述ASCII副本创建于2019年12月16日，名为DIM-010WO_SL_ST25.txt，大小为42,290字节。

技术领域

本申请总体上涉及用于治疗糖原贮积病例如Ia型糖原贮积病的病毒载体，更具体地涉及腺相关病毒载体。

背景技术

Ia型糖原贮积病(也称为GSD-Ia或肝糖原累积症(von Gierke disease))是一种由糖原在身体细胞中积聚引起的遗传性疾病。糖原在某些器官和组织中的积累，尤其是在肝脏、肾脏和小肠中的积累，会损害其正常运作的能力。GSD-Ia通常出现在出生后的第一年，伴有由糖原积累引起的严重低血糖和肝肿大。受影响的个体表现出生长迟缓、青春期延迟、乳酸性酸血症、高脂血症、高尿酸血症，以及在成人中的高肝腺瘤发病率。参见Lei等人,1993,Science[科学]262:580-3。

GSD-Ia是一种罕见的孤儿遗传病，由活性葡萄糖-6-磷酸酶-α(G6P酶-α)缺陷引起，G6P酶-α是一种参与维持葡萄糖稳态的关键酶。G6P酶-α由G6PC基因编码，在糖原分解和糖异生的最后一步催化葡萄糖-6-磷酸(G6P)水解为葡萄糖和磷酸盐。迄今为止，已经鉴定了超过80种导致G6P酶-α缺陷和GSD-Ia相关发展的突变。参见Chou等人,2010,Nat RevEndocrinol[自然评论内分泌]6(12):676-88。

目前无法治愈GSD-Ia，目前针对患者的护理标准是膳食补充。如果严格遵循，膳食策略通常可以促进正常生长和青春期发育，但膳食疗法并不能完全预防高脂血症、高尿酸血症、乳酸性酸血症和肝脏脂肪堆积的发生。参见Rake等人,2002,Eur J Pediatr[欧洲小儿外科杂志]161增刊1:S20-34。

已经探索了使用携带G6P酶-α的重组腺相关病毒(AAV)的基因治疗方法来管理GSD-Ia。参见，例如，美国专利号9,644,216和美国专利公开号2017/0362670。然而，要将AAV载体用于人基因疗法，开发稳健、可靠且可扩展的载体生产方法至关重要。发明人已经发现，当从各种宿主细胞平台表达时，修饰G6PC基因的启动子/增强子区域以去除某些序列(本文描述为“Alu元件”)显著提高了rAAV产量和质量。

发明内容

本发明提供用于治疗糖原贮积病的方法和组合物。更具体地，本文提供了可用于基因疗法应用以治疗GSD-Ia的重组核酸分子、腺相关病毒(AAV)载体和重组腺相关病毒(rAAV)。

一方面，本申请涉及包含经修饰的G6PC启动子/增强子(GPE)序列的重组核酸分子，其中所述经修饰的GPE缺少与Alu元件至少80％相同的一个或多个序列。在一些实施方案中，Alu元件选自SEQ ID NO:6的连续核苷酸1079-1272(Alu-1)、1633-1968(Alu-2)和2140-2495(Alu-3)。在一些实施方案中，经修饰的GPE具有与SEQ ID NO:1的连续核苷酸146-2123 80％(例如80％、85％、90％、95％或100％)相同的序列：或与SEQ ID NO:7、8、9、10、11或12 80％(，例如80％、85％、90％、95％或100％)相同的序列。