[发明专利]表达系统、重组细胞及其用途

权利要求书

1.一种真核表达系统，包括：

至少一种代谢影响产物(MIP)表达载体，其包括至少一个处于至少一个调控序列的控制下编码所述至少一个MIP的核酸。

2.权利要求1的真核表达系统，其中所述编码的MIP为：

-至少一个转录因子，优选为先锋转录因子，如Foxa1(叉头盒蛋白A1)或至少一个参与脂肪酸代谢的转录因子，如至少一个PPAR(过氧化物酶体增殖物激活受体)，

-至少一个调节RNA翻译的因子，如Casc3和/或

-至少一个结构蛋白，如肌动蛋白和/或蛋白质折叠蛋白，如Erp27(内质网蛋白27)，或与相应蛋白质折叠蛋白相互作用的蛋白如Erp57(内质网蛋白57)，

-至少一个参与信号转导、囊泡运输和/或细胞粘附活动的蛋白，如Tagap(T细胞激活GTP酶激活蛋白)、Rassf9(RAS相关结构域家族成员9)和/或Clstn3(钙同线蛋白3)，

-至少一个参与细胞存活和/或增殖的蛋白，如CDK15(细胞周期蛋白依赖性激酶15)或Ca3(碳酸酐酶3)，

-至少一个参与细胞凋亡的蛋白，如CFLAR(CASP8和FADD样凋亡调节因子)或SOD1(超氧化物歧化酶1)，和/或

-至少一个参与谷胱甘肽分解代谢的蛋白，如GCLM(谷氨酸半胱氨酸连接酶修饰亚基)或GGCT(γ-谷氨酰环化转移酶)。

3.权利要求1或2的真核表达系统，其中所述至少一个MIP包括至少一个PPAR，特别是PPARα、PPARβ/δ或PPARγ。

4.前述权利要求中任一项的真核表达系统，其中所述至少一个MIP包括Foxa1和/或Foxa1的次级MIP，如Ca3、Rassf9、Tagap或它们的组合。

5.上述权利要求中任一项的真核表达系统，其中所述至少一个MIP为肌动蛋白。

6.上述权利要求中任一项的真核表达系统，其中所述至少一个MIP是包括Erp27和任选的Erp57的蛋白质折叠蛋白。

7.上述权利要求中任一项的真核表达系统，其中所述至少一个调控序列是选自CMV、EF1α、CMV/EF1α、SV40、RSV和PGK的启动子，具有CMV、EF1α、CMV/EF1α、SV40、RSV和PGK的表达水平的启动子以及它们的组合。

8.上述权利要求中任一项的真核表达系统，其中所述至少一个MIP包括至少一个初级MIP和至少一个或两个或三个既不是初级MIP也不是次级MIP的另外的MIP。

9.上述权利要求中任一项的真核表达系统，包括至少2个、3个、4个、5个或更多个MIP。

10.上述权利要求中任一项的真核表达系统，其中所述MIP表达载体还包括编码所述MIP的核酸上游的第一ITR(末端反向重复)和下游的第二ITR。

11.上述权利要求中任一项的真核表达系统，其中所述至少一个调控序列包括MAR元件或MAR构建体，如MAR 1-68和/或MARX-29，包括单个MAR元件或MAR构建体，任选在第一ITR和第二ITR之间。

12.上述权利要求中任一项的真核表达系统，其中所述MIP表达载体是转座子供体载体，并且其中所述表达系统还包括转座酶表达辅助载体或mRNA。

13.上述权利要求中任一项的真核表达系统，包括载体质粒，所述载体质粒包括至少一个适于插入编码目的蛋白的核酸的限制酶切割位点，任选还包括抗生素抗性基因和/或维生素转运蛋白，如钠-多维生素转运体SLC5A6。

14.权利要求12或13的真核表达系统，其中所述转座酶表达辅助载体包括编码PB转座酶的序列，任选在上游和下游侧接有非翻译末端区(UTR)。