[发明专利]酶法生产己糖

权利要求书

1.一种由淀粉或淀粉衍生物酶法生产己糖的改进方法，其中所述改进包括以下至少一种：

a)由磷酸葡萄糖变位酶(PGM)催化将葡萄糖1-磷酸(G1P)转化为葡萄糖6-磷酸(G6P)的步骤，其中所述PGM包含与SEQ ID NO:2-8中的任一个序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；

b)由α-葡聚糖磷酸化酶(αGP)催化将淀粉衍生物转化为G1P的步骤，其中所述αGP包含与SEQ ID NO:10-13中的任一个序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和

c)由4-α-葡聚糖转移酶(4GT)催化的淀粉衍生物的转糖基化步骤，其中所述4GT包含与SEQ ID NO:15-17中的任一个序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。

2.一种由纤维素或纤维素衍生物酶法生产己糖的改进方法，其中所述改进包括由磷酸葡萄糖变位酶(PGM)催化将G1P转化为葡萄糖6-磷酸(G6P)的步骤，其中所述PGM包含与SEQID NO:2-8中的任一个序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。

3.一种由蔗糖酶法生产己糖的改进方法，其中所述改进包括以下至少一种：

a)由磷酸葡萄糖变位酶(PGM)催化将葡萄糖1-磷酸(G1P)转化为葡萄糖6-磷酸(G6P)的步骤，其中所述PGM包含与SEQ ID NO:2-8中的任一个序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和

b)使用蔗糖磷酸化酶将蔗糖转化为葡萄糖1-磷酸(G1P)的步骤，其中所述蔗糖磷酸化酶包含与SEQ ID NO:19-25中的任一个序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的改进方法，其中所述己糖选自由阿洛糖、甘露糖、半乳糖、果糖、阿卓糖、塔罗糖、山梨糖、古洛糖、艾杜糖、阿卢糖、肌糖和塔格糖组成的组。

5.根据权利要求1所述的改进方法，其中所述淀粉衍生物选自由直链淀粉、支链淀粉、可溶性淀粉、淀粉糊精、麦芽三糖、麦芽糖和麦芽糊精组成的组。

6.权利要求1-4中任一项所述的改进方法，进一步包括使用磷酸己糖磷酸酶使磷酸己糖去磷酸化的步骤。

7.根据权利要求6所述的改进方法，其中所述方法步骤在单个反应容器中进行。

8.根据权利要求7所述的改进方法，其中所述方法步骤在在无ATP、无NAD(P)(H)、约0.1mM至约150mM的磷酸盐浓度下进行，磷酸盐可循环利用，和/或磷酸己糖的去磷酸化的步骤涉及能量上有利的化学反应。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的改进方法，其中所述方法步骤在以下方法条件中的至少一个下进行：

在约37℃至约85℃的温度范围内，

在约5.0至约8.0的pH范围内，或

进行约0.5小时至约48小时，或作为连续反应。

10.根据权利要求4所述的改进方法，进一步包括将己糖还原成其糖醇的步骤。

11.根据权利要求4所述的改进方法，其中所述PGM的活性比源自柯达热球菌(UniprotID Q68BJ6)的PGM的活性高至少10％。

12.根据权利要求1所述的改进方法，其中所述αGP的活性比源自海栖热袍菌(UniprotID G4FEH8)的αGP的活性高至少10％。

13.根据权利要求1所述的改进方法，其中所述4GT的活性比源自栖热球菌(Uniprot IDO32462)的4GT的活性高至少10％。

14.根据权利要求3所述的改进方法，其中所述SP的活性比源自解热嗜热厌氧杆菌(Uniprot ID D9TT09)的SP的活性高至少10％。

15.根据权利要求3所述的改进方法，其中所述SP的可达到的产率比源自解热嗜热厌氧杆菌(Uniprot ID D9TT09)的SP的可达到的产率高至少10％。