[发明专利]制备高强度甜味剂的方法

权利要求书

1.一种产生具有以下结构的化合物1的方法：

该方法包括：

将罗汉果苷III_E与包含能够从罗汉果苷III_E中催化产生化合物1的第一酶的重组宿主细胞接触，其中该重组宿主细胞包括：

(1)一种细胞色素P450，其含有一种氨基酸序列，该序列与SEQ ID NOs:1025、1027、1029、1031、1033、1035、1037、1039、1041、1043、1045、1047和1049中的任一个具有至少80％的序列同一性；和/或

(2)一种细胞色素P450，其由一种核酸序列编码，该序列与SEQ ID NO:1024、1026、1028、1030、1032、1034、1036、1038、1040、1042、1044、1046和1048中的任一个具有至少80％的序列同一性；和/或

(3)一种糖基化酶，其含有一种氨基酸序列，该序列与SEQ ID NOs:1051、1053、1055、1057、1059、1061、1063、1065、1067、1069、1074、1076、1078、1080、1082、1084、1086、1088、1090、1092和1094-1149中的任一个具有至少80％的序列同一性；和/或

(4)一种糖基化酶，其由一种核酸序列编码，该序列与SEQ ID NO:1050、1052、1054、1056、1058、1060、1062、1064、1066、1068、1070、1075、1077、1079、1081、1083、1085、1087、1089、1091、和1093中的任一个具有至少80％的序列同一性；和/或

(5)一种环氧化物水解酶，其包含一种氨基酸序列，该序列与SEQ ID NO:1073具有至少80％的序列同一性；和/或

(6)一种环氧化物水解酶，其由一种核酸序列编码，该序列与SEQ ID NO:1072具有至少80％的序列同一性。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述重组宿主细胞包括编码第一酶的第一基因。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中罗汉果苷III_E存在于重组宿主细胞中和/或由重组宿主细胞产生。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，包括在表达第一酶的条件下在培养基中培养重组宿主细胞。

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中第一酶是UDP糖基转移酶、环麦芽糊精葡聚糖转移酶(CGTase)、糖基转移酶、葡聚糖蔗糖酶、纤维素酶、β-葡糖苷酶、淀粉酶、转葡糖苷酶、果胶酶和葡聚糖酶中的一种或多种。

6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，该方法包括使罗汉果苷IIA与重组宿主细胞接触以产生罗汉果苷III_E，其中重组细胞包含能够催化从罗汉果苷IIA产生罗汉果苷III_E的第二酶。

7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，包括使罗汉果醇与重组宿主细胞接触，其中重组宿主细胞包含一种或多种能够催化从罗汉果醇中产生罗汉果苷IIE和/或IIIE的酶。

8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，包括使罗汉果苷IA1与重组宿主细胞接触，其中所述重组宿主细胞包含编码UGT98或UGT SK98酶的基因，包含与SEQ ID NO:9、407、16或306具有至少70％序列同一性的一种氨基酸序列。

9.如权利要求1-8中任一项所述的方法中所述方法包括使11-羟基-24,25环氧葫芦二烯醇与所述重组宿主细胞接触，其中所述重组宿主细胞包含编码环氧化物水解酶的第三基因。

10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述方法包括使11-羟基-葫芦二烯醇与所述重组宿主细胞接触，其中所述重组宿主细胞包含编码细胞色素P450或环氧化物水解酶的第四基因。