[发明专利]末端脱氧核苷酸转移酶变体及其用途

权利要求书

1.一种末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)变体，所述末端脱氧核苷酸转移酶变体包含与选自SEQ ID NO:3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、24、25或26的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列，具有在以下位置处的取代：在相对于SEQ ID NO:3、8、10和14的位置Q326处的取代，或在相对于SEQ ID NO:4和5的位置Q325处的取代，或在相对于SEQ ID NO:7和9的位置Q332处的取代，或在相对于SEQ ID NO:13和16的位置Q329处的取代，或在相对于SEQ ID NO:6的位置Q321处的取代，或在相对于SEQ ID NO:11的位置Q327处的取代，或在相对于SEQ ID NO:12的位置Q324处的取代，或在相对于SEQ ID NO:15的位置Q339处的取代，或在相对于SEQ ID NO:24和26的位置Q309处的取代，或在相对于SEQ ID NO:25的位置Q307处的取代，其中所述TdT变体(i)能够在无模板的条件下合成核酸片段，并且(ii)能够将3’-O-修饰的核苷酸掺入到核酸片段上。

2.根据权利要求1所述的TdT变体，所述TdT变体还包含以下一种或更多种：

(i)在相对于SEQ ID NO:3、7、8、9、10、13和14的位置K265处的取代，或在相对于SEQ IDNO:6和12的位置K263处的取代，或在相对于SEQ ID NO:5的位置K264处的取代，或在相对于SEQ ID NO:11的位置K266处的取代，或在相对于SEQ ID NO:16的位置K268处的取代，或在相对于SEQ ID NO:15的位置K272处的取代；

(ii)在相对于SEQ ID NO:3、8、10和14的位置H337处的取代，或在相对于SEQ ID NO:4和5的位置H336处的取代，或在相对于SEQ ID NO:7和9的位置H343处的取代，或在相对于SEQ ID NO:13和16的位置H340处的取代，或在相对于SEQ ID NO:6的位置H332处的取代，或在相对于SEQ ID NO:11的位置H338处的取代，或在相对于SEQ ID NO:12的位置H335处的取代，或在相对于SEQ ID NO:15的位置H350处的取代；

(iii)在相对于SEQ ID NO:3、8、10和14的位置W377处的取代，或在相对于SEQ ID NO:4和5的位置W376处的取代，或在相对于SEQ ID NO:6的位置W372处的取代，或在相对于SEQID NO:13的位置W380处的取代，或在相对于SEQ ID NO:6的位置W372处的取代，或在相对于SEQ ID NO:9的位置W383处的取代，或在相对于SEQ ID NO:11的位置W378处的取代，或在相对于SEQ ID NO:12的位置H375处的取代，或在相对于SEQ ID NO:13的位置W380处的取代，或在相对于SEQ ID NO:15的位置W390处的取代；

(iv)在相对于SEQ ID NO:3、4、5、6、8、10、13、14和15的位置A17处的取代，或在相对于SEQ ID NO:11和16的位置A18处的取代；

(v)在相对于SEQ ID NO:3和15的位置G57处的取代；或

(vi)在相对于SEQ ID NO:3的位置Q261处的取代，或在相对于SEQ ID NO:6的位置Q262处的取代，或在相对于SEQ ID NO:4的位置Q264处的取代。