[发明专利]用于治疗庞贝氏病的治疗性腺相关病毒

权利要求书

1.一种重组腺病毒相关(AAV)载体，所述载体在其基因组中包含：

a.5'和3'AAV反向末端重复(ITR)序列；以及

b.位于5'和3'ITR之间的异源核酸序列，所述异源核酸序列编码包含分泌信号肽和α-葡萄糖苷酶(GAA)多肽的融合多肽，其中，所述异源核酸可操作地连接至启动子。

2.根据权利要求1所述的重组AAV载体，其中，编码融合多肽的所述异源核酸序列进一步包含位于所述分泌信号肽和所述α-葡萄糖苷酶(GAA)多肽之间的IGF-2序列。

3.根据权利要求2所述的重组AAV载体，其中，所述AAV基因组以5'至3'的方向包含：

a.5'ITR；

b.启动子序列；

c.内含子序列；

d.编码分泌信号肽的核酸；

e.编码IGF-2序列的核酸；

f.编码α-葡萄糖苷酶(GAA)多肽的核酸；

g.poly A序列；以及

h.3'ITR。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的重组AAV载体，其中，所述分泌信号肽选自AAT信号肽、纤连蛋白信号肽(FN)、GAA信号肽或它们的具有分泌信号活性的活性片段。

5.根据权利要求1-3中任一项所述的重组AAV载体，其中，所述IGF-2前导序列结合人非阳离子依赖性甘露糖-6-磷酸受体(CI-MPR)或IGF-2受体。

6.根据权利要求5所述的重组AAV载体，其中，所述IGF-2序列包含SEQ ID NO:5或包含结合至IGF-2受体的SEQ ID NO:5中的至少一个氨基修饰。

7.根据权利要求6所述的重组AAV载体，其中，SEQ ID NO:5中的所述至少一个氨基修饰是V43M氨基酸修饰(SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:9)或Δ2-7(SEQ ID NO:6)或Δ1-7(SEQ IDNO:7)。

8.根据权利要求1-3中任一项所述的重组AAV载体，其中，所述启动子是组成型、细胞特异性或诱导型的。

9.根据权利要求1-3中任一项所述的重组AAV载体，其中，所述启动子是肝特异性启动子。

10.根据权利要求9所述的重组AAV载体，其中，所述肝特异性启动子选自以下中的任一项：甲状腺素转运蛋白启动子(TTR)、LSP启动子(LSP)、合成型肝特异性启动子。

11.根据权利要求1或2所述的重组AAV载体，其中，所述核酸序列编码野生型GAA多肽或经修饰的GAA多肽。

12.根据权利要求1-3中任一项所述的重组AAV载体，其中，编码所述GAA多肽的核酸序列是人GAA基因或人密码子优化的GAA基因(CoGAA)或经修饰的GAA核酸序列。

13.根据权利要求1-3或权利要求12中任一项所述的重组AAV载体，其中，编码所述GAA多肽的核酸序列经密码子优化以增强体内表达。

14.根据权利要求1-3或权利要求12中任一项所述的重组AAV载体，其中，编码所述GAA多肽的核酸序列经密码子优化以减少CpG岛。

15.根据权利要求1-3或权利要求12中任一项所述的重组AAV载体，其中，编码所述GAA多肽的核酸序列经密码子优化以降低固有免疫应答。

16.根据权利要求1-3或权利要求12中任一项所述的重组AAV载体，其中，编码所述GAA多肽的核酸序列经密码子优化以减少CpG岛并降低固有免疫应答。