[发明专利]选择针对目标物质的响应性高的细胞的方法、及确定试样中未知浓度的目标物质的浓度的方法在审
申请号: | 201980089638.8 | 申请日: | 2019-11-06 |
公开(公告)号: | CN113316644A | 公开(公告)日: | 2021-08-27 |
发明(设计)人: | 木村祐史;风见纱弥香;桥本优;伊藤博康 | 申请(专利权)人: | 浜松光子学株式会社 |
主分类号: | C12Q1/02 | 分类号: | C12Q1/02;C12M1/34;G01N33/53;G01N33/566 |
代理公司: | 北京尚诚知识产权代理有限公司 11322 | 代理人: | 杨琦;丁哲音 |
地址: | 日本*** | 国省代码: | 暂无信息 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 选择 针对 目标 物质 响应 细胞 方法 确定 试样 未知 浓度 | ||
1.一种方法,其中,
所述方法是选择针对目标物质的响应性高的细胞的方法,并且具备如下工序:
(1a)使包含目标物质的试样接触多个细胞的工序,
所述细胞是具有所述目标物质的受体和荧光指示剂的细胞,
所述荧光指示剂发出所述目标物质与所述受体结合的结果的荧光;
(1b)算出每个所述细胞的荧光强度的上升速度的工序;及
(1c)选择所述多个细胞中显示出前50%以内的所述荧光强度的上升速度的任意的细胞的工序。
2.如权利要求1所述的方法,其中,
所述方法使用微流路装置来实施,该微流路装置具有:
第一流路;
第二流路,其与所述第一流路相邻;及
联络部,其连接所述第一流路与所述第二流路,并且在所述第一流路侧具有能够捕捉所述细胞的开口部,
所述工序1a具备如下工序:
(A1)以所述第一流路内的压力高于所述第二流路内的压力的方式,将包含所述多个细胞的悬浮液导入所述第一流路,并在所述第一流路侧的开口部捕捉所述细胞的工序;和
(A2)在维持所述第一流路与所述第二流路的压力差的状态下,将包含目标物质的试样导入所述第一流路或所述第二流路,使包含所述目标物质的试样接触所述被捕捉的细胞的工序,
在所述工序1c之后,具备如下工序:
(1d)以所述第二流路内的压力高于所述第一流路内的压力的方式,将液体导入所述第二流路,自所述开口部释放所述被捕捉的细胞的工序;和
(1e)回收所述被释放的细胞中所述被选择的任意的细胞的工序。
3.如权利要求1或2所述的方法,其中,
所述荧光强度的上升速度是规定时间中It的时间变化率,
所述It为(Ft-F0)/F0,
所述F0表示接触所述试样之前的所述细胞的荧光强度,
所述Ft表示接触所述试样之后且所述荧光强度达到平台期之前的任意阶段中的所述细胞的荧光强度,
所述规定时间是接触所述试样之后且所述荧光强度达到平台期之前的任意两个阶段之间的时间。
4.如权利要求1~3中任一项所述的方法,其中,
在所述工序1c中,选择所述多个细胞中显示出前30%以内的所述荧光强度的上升速度的任意的细胞。
5.一种方法,其中,
所述方法是确定试样中未知浓度的目标物质的浓度的方法,并且具备如下工序:
(2a)使包含已知浓度的目标物质的标准试样接触多个细胞的工序,
所述细胞是具有所述目标物质的受体和荧光指示剂的细胞,
所述荧光指示剂发出所述目标物质与所述受体的结合的结果的荧光;
(2b)算出每个所述细胞的荧光强度的上升速度的工序;
(2c)使用1个以上包含不同浓度的所述目标物质的标准试样,重复工序2a及工序2b的组合,对于各标准试样算出荧光强度的上升速度的工序;
(2d)使包含未知浓度的目标物质的试样接触所述细胞的工序;
(2e)算出每个所述细胞接触所述试样之后的荧光强度的上升速度的工序;
(2f)选择所述细胞中对所述试样或任一所述标准试样所计算出的荧光强度的上升速度在前50%以内的任意的细胞的工序;及
(2g)将工序2e中对所述试样所计算出的荧光强度的上升速度与工序2b及工序2c中对所述标准试样所计算出的荧光强度的上升速度进行比较,算出所述试样中的所述目标物质的浓度的工序,其中,所述被比较的上升速度是对工序2f中被选择的细胞所计算出的上升速度,
工序2a、2b、2c、2d、2e及2g以该顺序进行,
工序2f在工序2b之后且工序2g之前的任意阶段进行。
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