[发明专利]针对人细胞间粘附分子1(ICAM-1)的反义药物

说明书

本发明涉及抑制人细胞中粘附分子ICAM‑1的表达的特异性反义寡核苷酸。本发明还涉及含有所述寡核苷酸的载体和含有所述载体或寡核苷酸的宿主细胞以及含有所述寡核苷酸的药物组合物及其用途，特别是在治疗人的炎症性疾病或疾病状态中的用途。

本发明涉及抑制人细胞中粘附分子ICAM-1的表达的特异性反义寡核苷酸。本发明还涉及含有所述寡核苷酸的载体和含有所述载体或寡核苷酸的宿主细胞以及含有所述寡核苷酸的药物组合物及其用途，特别是在治疗人的炎症性疾病或疾病状态中的用途。

反义寡核苷酸(asON)是长度通常在16至24个核苷酸的合成的单链核酸。它们以序列特异性方式通过Watson-Crick相互作用与单链靶信使RNA(mRNA)结合，并且因此代表主要是通过抑制靶基因表达在转录后水平的干扰基因表达的主要工具。

自1978年首次报道asON(参见Zamecnik,P.C.,Stephenson,M.L.,Proc.Natl.Acad.Sci.,U.S A.,Vol.75,pp.280-284(1978))，已经开发了多种化学修饰，其通过许多特征改善功效，所述特征包括(i)靶细胞和靶环境中延长的半衰期，(ii)通过提高与靶mRNA的复合物的稳定性的生物效力，(iii)向靶细胞和组织改善的递送，以及(iv)降低的非特异毒性和不希望的副作用，例如免疫刺激。因此，寡核苷酸的所有部分(即糖部分、核碱基和核苷酸间磷酸骨架)已经是化学修饰的主体。

在过去的几十年中，已经开发了用于asON的所谓三代至几乎四代化学(参见Deleavey,G.F.,Damha,M.J.,ChemistryBiology,Vol.19,pp.937-954(2012)；Khvorova,A.,Watts,J.K.,Nat.Biotechnol.,Vol.35,pp.238-248(2017))。通常，由asON的上述典型特性的渐进改进来表征asON的新生代。通过化学修饰的asON的相关组，反义效果程度的比较清楚地显示了效力等级，为LNA(锁核酸)硫代磷酸酯修饰的骨架2’-OMe-修饰的糖(参见图1和表1以及Grünweller,A.et al.,Nucl.Acids Res.,Vol.31,pp.3185-3193(2003))。

表1：由IC₅₀值所示的修饰的asON的性能等级。

asON的高效力的第二关键先决条件与靶RNA的局部结构及其可达性有关(参见Bo,X.et al.,BmC Bioinformatics 7:122,(2006)；Schubert,S.et al.,J.Mol.Biol.Vol.348,pp.883-893(2005)；Sczakiel,G.,Kretschmer-Kazemi Far,R.,Curr.Opin.Mol.Ther.,Vol.4,pp.149-153(2002))。一旦已经定义了局部靶点，就不能改变该因素。因此，在给定的有利局部靶点的情况下，仅能够通过所选择的反义分子的性质即通过修改其化学性质来改善功效。

通常，在适当的细胞系统中测试asON的生物学功效。在人靶基因的情况下，测试开始于适当的人细胞系。通常，引起50％靶抑制(IC₅₀值)的抑制剂的剂量用于比较功效。然而，在基于寡核苷酸的药物/抑制剂的情况下，剂量-响应关系可能是不规则的。这意味着有时不能实现100％的靶基因抑制，或者抑制不是剂量依赖的。因此，优选地使用更多参数来表征asON的生物效应。因此，关于对给定靶使用asON的抑制研究常常用以下表征：(i)“靶抑制的最大可实现程度”，(ii)半最大靶抑制(IC₅₀值)的浓度、给定asON浓度(例如100nM)下靶抑制的程度，以及(iv)总体剂量-响应关系。靶抑制的这些关键参数常常以非理性的方式变化。因此，通常考虑全面描述反义寡核苷酸和对照寡核苷酸的作用。