[发明专利]确定样品中PH和钙浓度或氯浓度的方法

权利要求书

1.用于同时确定样品中的1)pH、和2)Ca²⁺浓度或Cl^-浓度的方法，所述方法包括：

提供核酸复合物，所述核酸复合物包含第一单链核酸分子和第二单链核酸分子，

所述第一单链核酸分子包含交联至所述第一链的Ca²⁺荧光团或Cl^-荧光团，

所述第二单链核酸分子与所述第一单链分子部分地或完全地互补，

其中，所述核酸复合物进一步包含第一标记物，所述第一标记物缀合至所述第一单链核酸分子或所述第二单链核酸分子，并且所述第一标记物能够产生信号，其中，所述信号的强度取决于pH的变化；

测量所述信号的强度；以及

由所测量的信号确定所述pH与Ca²⁺浓度或Cl^-浓度。

2.如权利要求1所述的方法，其中，测定在早期内体、晚期内体、质膜、溶酶体、自噬溶酶体、循环内体、顺式高尔基体网络、反式高尔基体网络、内质网、过氧化物酶体或分泌囊泡中进行。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中，所述核酸复合物包含交联至所述第一链的Cl^-荧光团。

4.如权利要求3所述的方法，其中，所述Cl^-荧光团包括10,10'-双[3-羧丙基]-9,9'-二吖啶鎓二硝酸盐。

5.如权利要求1或2所述的方法，其中，所述核酸复合物包含交联至所述第一链的Ca²⁺荧光团。

6.如权利要求5所述的方法，其中，所述Ca²⁺荧光团为单波长指示剂。

7.如权利要求5所述的方法，其中，所述交联的Ca²⁺荧光团为：

或者

其中，包含Ca²⁺荧光团的所述第一单链核酸分子为下式：

其中，R为接头。

8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中，取决于pH变化的信号的强度根据所述核酸复合物的构象而改变。

9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中，所述核酸进一步包含缀合至所述第一单链核酸或所述第二单链核酸的第二标记物。

10.如权利要求9所述的方法，其中，所述信号的强度根据以下中的至少一种而改变：所述第一标记物和第二标记物之间的距离，以及所述第一标记物和所述第二标记物的相对取向。

11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中，所述第一单链核酸分子和第二单链核酸在酸性条件下形成i-基序。

12.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中，所述第二单链核酸能够形成分子内复合物，所述分子内复合物包含在酸性条件下以反平行取向插入的两个以C-HC+碱基配对的平行链双链体。

13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中，所述核酸复合物进一步包含第三单链核酸分子，所述第三单链核酸分子与所述第一单链分子部分地互补。

14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中，所述核酸复合物进一步包含靶向部分。

15.如权利要求1-14中任一项所述的方法，其中，所述第一单链核酸分子和/或第二单链核酸分子少于200个核苷酸；或少于100个核苷酸；或少于50个核苷酸。