[发明专利]可用于基因编辑的多肽及使用方法

权利要求书

1.一种包含编码RNA指导的核酸酶(RGN)多肽的核酸分子，其中所述多核苷酸包含编码RGN多肽的核苷酸序列，所述RGN多肽包含与SEQ ID NO：1、16、24、35、43或50具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；

其中当所述RGN多肽与能够与目标DNA序列杂交的指导RNA(gRNA)结合时，所述RGN多肽以RNA指导的序列特异性方式与所述目标DNA序列结合，以及

其中所述编码RGN多肽的多核苷酸可操作地连接至与所述多核苷酸异源的启动子。

2.权利要求1所述的核酸分子，其中所述RGN多肽是核酸酶失活的或作为切口酶。

3.权利要求2所述的核酸分子，其中所述RGN多肽是可操作地融合至碱基编辑多肽。

4.一种包含权利要求1至3中任一项所述的核酸分子的载体。

5.权利要求4所述的载体，其中所述载体还包含编码所述指导RNA的至少一个核苷酸序列，并且其中所述指导RNA包含CRISPR RNA，所述CRISPR RNA包含与SEQ ID NO：2、17、25、36、44、51或63具有至少95％序列同一性的CRISPR重复序列。

6.权利要求4或5所述的载体，其中所述指导RNA包含与SEQ ID NO：3、18、26、37、45、52或62具有至少95％序列同一性的tracrRNA。

7.一种包含权利要求1至3中任一项所述的核酸分子或权利要求4至6中任一项所述的载体的细胞。

8.一种包含编码CRISPR RNA(crRNA)的多核苷酸的核酸分子，其中所述crRNA包含间隔序列和CRISPR重复序列，其中所述CRISPR重复序列包含与SEQ ID NO：2、17、25、36、44、51或63具有至少95％序列同一性的核苷酸序列；

其中指导RNA包含：

a)所述crRNA；以及

b)与所述crRNA的所述CRISPR重复序列杂交的反式激活CRISPR RNA(tracrRNA)；

当所述指导RNA与RNA指导的核酸酶(RGN)多肽结合时，所述指导RNA能够通过所述crRNA的所述间隔序列以序列特异性方式与目标DNA序列杂交，以及

其中所述编码crRNA的多核苷酸可操作地连接至与所述多核苷酸异源的启动子。

9.一种包含权利要求8所述的核酸分子的载体。

10.权利要求9所述的载体，其中所述载体还包含编码所述tracrRNA的多核苷酸。

11.一种包含编码反式激活CRISPR RNA(tracrRNA)的多核苷酸的核酸分子，所述tracrRNA包含与SEQ ID NO：3、18、26、37、45、52或62具有至少95％序列同一性的核苷酸序列；

其中指导RNA包含：

a)所述tracrRNA；以及

b)包含间隔序列和CRISPR重复序列的crRNA，其中所述tracrRNA与所述crRNA的所述CRISPR重复序列杂交；

当所述指导RNA与RNA指导的核酸酶(RGN)多肽结合时，所述指导RNA能够通过所述crRNA的所述间隔序列以序列特异性方式与目标DNA序列杂交，以及

其中所述编码tracrRNA的多核苷酸可操作地连接至与所述多核苷酸异源的启动子。

12.一种包含权利要求11所述的核酸分子的载体。

13.权利要求12所述的载体，其中所述载体还包含编码所述crRNA的多核苷酸。