[发明专利]眼用蛋白质药物的精制方法

权利要求书

1.一种用于通过应用阳离子交换色谱来精制具有6.0-8.3的范围内的等电点的阿柏西普的方法，该方法执行的步骤包括以下步骤：

(a)将阿柏西普混合物上样至使用pH 4.5-6.6的缓冲溶液平衡的阳离子交换树脂上；

(b)在pH 4.5-6.6的条件下，使用包含0-40mM氯化钠或氯化钾的缓冲溶液进行洗涤；以及

(c)在pH 4.5-6.6的条件下，通过使用包含比步骤(b)中的浓度高的40-120mM的氯化钠或氯化钾的缓冲溶液洗脱来收集具有6.0-8.3的范围内的等电点的阿柏西普。

2.如权利要求1所述的方法，其中用于柱平衡、洗涤和洗脱的缓冲溶液是乙酸钠或磷酸钠缓冲液。

3.如权利要求1所述的方法，其中用于阳离子交换树脂的配体是羧甲(CM)基。

4.一种用于通过应用阴离子交换色谱来精制具有6.0-8.3的范围内的等电点的阿柏西普的方法，该方法执行的步骤包括以下步骤：

(a)将阿柏西普混合物上样至使用pH 7.5-9.0的缓冲溶液平衡的阴离子交换树脂上；

(b)在pH 7.5-9.0的条件下，使用包含0-20mM氯化钠或氯化钾的缓冲溶液进行洗涤；以及

(c)在pH 7.5-9.0的条件下，通过使用包含比步骤(b)中的浓度高的20-150mM的氯化钠或氯化钾的缓冲溶液洗脱来收集具有6.0-8.3的范围内的等电点的阿柏西普。

5.如权利要求4所述的方法，其中用于柱平衡、洗涤和洗脱的缓冲溶液是磷酸钠或Tris缓冲液。

6.如权利要求4所述的方法，其中用于阴离子交换树脂的配体是季铵(Q)基。

7.如权利要求1或4所述的方法，其中在对阿柏西普混合物执行离子交换色谱之前，应用从蛋白质A亲和色谱、混合模式或多模式色谱和脱盐超滤组成的组中选择的至少一种。

8.一种用于通过组合执行如权利要求1所述的阳离子交换色谱和如权利要求4所述的阴离子交换色谱来精制具有6.0-8.3的范围内的等电点的阿柏西普的方法。

9.一种用于配制最终精制的阿柏西普以具有以下三种组合物中的任何一种以适于玻璃体内注射的方法：

(a)10mM乙酸钠、7％蔗糖、0.03％聚山梨酯20的组合物，组合物pH 5.5；

(b)10mM乙酸钠、6.5％蔗糖、15mM氯化钠、0.03％聚山梨酯20的组合物，组合物pH 5.5；以及

(c)50mM乙酸钠、6％蔗糖、0.03％聚山梨酯20的组合物，组合物pH 5.5。