[发明专利]被修饰以用于生产复合酶的木霉属真菌菌株

说明书

本发明涉及一种木霉属(Trichoderma)新菌株，包括能够提高复合酶的产量的基因修饰，至少涉及根据SEQ ID No.1的转录因子Xyr1的上调；根据SEQ ID No.2的ACE1基因的中断；根据SEQ ID No.3的SLP1基因的中断；以及根据SEQ ID No.4的来自埃默森罗萨氏菌(Rasamsonia emersonii)的Cel3a基因的表达。

技术领域

本发明涉及一种木霉属(Trichoderma)新菌株，包括能够提高复合酶的产量的基因修饰。

背景技术

纤维素酶或半纤维素酶是构成能够作用于纤维素物质并促进其水解的复合物的酶。此类酶是在糖的释放中作用的高特异性生物催化剂，由于葡萄糖有可能转化为乙醇，所以葡萄糖是引起最大工业兴趣的一种糖。纤维素酶的高效生产对于生物精炼的定义很重要，生物精炼使用可再生木质纤维素物质生产具有高附加值的燃料和化学品。

由于其工业重要性，近几十年来，已经公布了关于影响这些酶及其理想培养基的生产的因素的若干研究。这是因为在从木质纤维素物质生产乙醇的背景下，纤维素酶是影响该过程的输入，并且可以代表工厂的重大运营成本。

为了提高酶生产的水平，可以使用不同的技术，其中有关纤维素酶的最常见技术是通过经典(随机)突变或通过基因表达来选择真菌。几十年来，该经典突变一直应用于诸如木霉属(Trichoderma)的真菌菌株。

在这个意义上，里氏木霉(Trichoderma reesei)(Martinez D.等人(2008)，生物质降解真菌里氏木霉的基因组测序和分析(Genome sequencing and analysis of thebiomass-degrading fungus Trichoderma reesei)Nat Biotechnol.26,553-560)，一种嗜温丝状真菌，红褐肉座菌(Hypocrea jecorina)真菌的无性型，已经生成了若干具有特定性质的菌株，其中报道最多的是Rut C30菌株(Koike H.等人(2013)，里氏木霉菌株的比较基因组学分析(Comparative genomics analysis of Trichoderma reesei strains.)Ind.Biotech.9(6):352-367)。由于cre1基因的突变(使得在酶的表达期间，细胞对葡萄糖的分解代谢阻遏作用更小)和内质网数量的增加(促进蛋白质的O糖基化速率提高)，该菌株的纤维素分解潜力提高。

已经证明，木霉属可用作宿主细胞以用于重组生产具有生物活性的多肽。一些出版物教导了通过中断或过表达一个或多个特定基因进行基因修饰，以寻求提高其活性(国际出版物WO9823642、WO17177289、WO11075677、WO10022518等)。

然而，由此类真菌生产的复合酶的活性表现仍然是一个挑战，因此非常需要结合基因修饰的选择的新菌株来提高复合酶的产量。

发明内容

本发明涉及一种木霉属(Trichoderma)新菌株，包括能够提高复合酶的产量的基因修饰选择，至少包括：如SEQ ID No.1所定义的转录因子Xyr1的过表达；根据SEQ ID No.2的ACE1基因的中断；根据SEQ ID No.3的SLP1基因的中断；以及根据SEQ ID No.4的来自埃默森罗萨氏菌(Rasamsonia emersonii)的Cel3a基因的表达。

另外，根据本发明的所述木霉属新菌株可以包括：根据SEQ ID No.5的PEP1基因的中断；和/或根据SEQ ID No.6的来自黑曲霉(Aspergillus niger)的SucA基因的表达。

附图说明

图1示出了称为CTBE_R2(对比)和CTBE_R4(根据本发明)的真菌菌株通过在含有糖蜜、酵母提取物和硫酸铵的生物反应器中培养而进行的酶的生产。