[发明专利]一种蛋白质的表达方法

权利要求书

1.一种抗PD-L1/CD47双功能融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述方法使用无血清、无动物源组分的基础培养基及补充培养基对含有抗PD-L1/CD47双功能融合蛋白基因序列的CHO宿主细胞进行培养表达，所述基础培养基为CHOM-B系列的组合培养基，所述补充培养基为CHOM-S系列的组合培养基。

2.根据权利要求1所述的抗PD-L1/CD47双功能融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述方法的CHO宿主细胞的培养表达包含细胞扩增阶段、灌流培养阶段及补充培养阶段，在细胞扩增和灌流培养阶段使用基础培养基，补充培养阶段使用补充培养基。

3.根据权利要求2所述的抗PD-L1/CD47双功能融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述CHO宿主细胞灌流培养阶段的条件为：温度为30℃~39℃；基础培养基pH为6.6~7.1；溶氧量30%~60%；每日补充葡萄糖3~5g/L；搅拌转速80~150rpm。

4.根据权利要求3所述的抗PD-L1/CD47双功能融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述CHO宿主细胞灌流培养阶段的条件为：温度为36℃~37℃；基础培养基pH为6.9~7.0；溶氧量45%~55%；每日补充葡萄糖3~5g/L；搅拌转速80~150rpm。

5.根据权利要求2所述的抗PD-L1/CD47双功能融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述CHO宿主细胞补充培养阶段的条件为：在灌流培养培养的第2~4天，降低温度至32℃~34℃，pH为7.0~7.3，添加补充培养基，进行补充培养，每日添加补充培养基的量为上灌体积的1%~5%，补充培养8~18天。

6.根据权利要求5所述的抗PD-L1/CD47双功能融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述CHO宿主细胞补充培养阶段的条件为：在灌流培养培养的第2~4天，降低温度至32.5℃~33.5℃，pH为7.0~7.1，添加补充培养基，进行补充培养，每日添加补充培养基的量为上灌体积的1%~5%，低温补充培养8~10天。

7.根据权利要求1-6所述的抗PD-L1/CD47双功能融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述基础培养基为CHOM-B01与CHOM-B02组合、CHOM-B01与CHOM-B03组合、CHOM-B01与CHOM-B02及CHOM-B03组合。

8.根据权利要求7所述的抗PD-L1/CD47双功能融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述基础培养基为CHOM-B01：CHOM-B02为1:1~1:5，CHOM-B01：CHOM-B03为1:1~1:0.1。

9.根据权利要求8所述的抗PD-L1/CD47双功能融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述基础培养基为CHOM-B01：CHOM-B03为1:1~1:0.5。

10.根据权利要求1-6所述的抗PD-L1/CD47双功能融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述补充培养基为CHOM-S01与CHOM-S03组合、CHOM-S01与CHOM-S04的组合、CHOM-S01与CHOM-S03及CHOM-S04组合。

11.根据权利要求10所述的抗PD-L1/CD47双功能融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述补充培养基为CHOM-S01：CHOM-S03为1:1~1:0.3，CHOM-S01：CHOM-S04为1:1~1:7。

12.根据权利要求11所述的抗PD-L1/CD47双功能融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述补充培养基为CHOM-S01：CHOM-S04为1:1~1:4。