[发明专利]一种α-L-岩藻糖苷酶测定试剂盒

说明书

本发明公开了一种α‑L‑岩藻糖苷酶测定试剂盒，涉及生物检测技术领域。所述的试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，其的成分及相应含量为：试剂R1：磷酸氢二钠7.5‑8.5g/L；柠檬酸5.0‑6.0g/L；叠氮钠0.2‑0.8g/L；试剂R2：磷酸氢二钠7.5‑8.5g/L；柠檬酸5.0‑6.0g/L；叠氮钠0.2‑0.8g/L；2‑氯‑4硝基苯‑α‑L‑岩藻吡喃糖苷4‑8g/L。本发明实施过程中在试剂R1和试剂R2加入精氨酸、天冬酰胺和蔗糖作为稳定剂，明显提高了试剂盒的准确度、精密度和稳定性，提供了一种准确度高、精密度好、稳定性强、线性关系好的α‑L‑岩藻糖苷酶测定试剂盒。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种α-L-岩藻糖苷酶测定试剂盒。

背景技术

α-L-岩藻糖苷酶(α-L-Fucosidase,AFU)是一种溶酶体酸性水解酶，广泛分布于人体内的各个组织、细胞及体液中。以肝、肾等组织活性较高，基本功能是催化含岩藻糖基的低聚糖、糖蛋白及糖苷的水解代谢，其本质是一种糖蛋白，在包括免疫反应、信号转导等多种方面发挥重要作用，研究发现，α-L-岩藻糖苷酶的测定在多种疾病的诊断及治疗中都有积极的作用。

测定α-L-岩藻糖苷酶的方法有荧光法、终点比色法和连续监测法。荧光法的研究者利用AFU水解4-甲基伞型酮α-L-岩藻吡喃糖苷释放4-甲基伞型酮，用碱性缓冲液终止反应，并使产物呈现荧光，用360nm或365nm激发波长和400nm或448nm发射波长检测荧光强度，对照不同浓度4-甲基伞型酮制备的标准曲线求酶的活性，此法敏感性高，适用范围广。但该法对仪器条件要求高，不适合用于自动化检测。终点比色法以对硝基苯酚α-L-岩藻糖苷为底物，在AFU催化下生成α-L-岩藻糖苷和对硝基苯酚，对硝基苯酚在碱性溶液中呈黄色，用分光光度计在405nm波长处检测。本法反应时间长，且操作较繁琐，干扰因素多，也不适用自动化检测。于秀艳等对其进行了改进，利用对硝基酚毫摩尔消光系数为18.5的特性，根据AFU在pH5.0的条件下催化对硝基苯－岩藻糖吡喃糖苷，生成对硝基酚和岩藻糖，在405nm波长下，对硝基酚有一吸收高峰，测其吸光度变化，不必做标准曲线，便可准确测出AFU含量。因本法采用因数两点法，可去除因溶血黄疸给试验带来的干扰。速率法(连续监测法)血清中AFU催化2-氯-对硝基酚α-L-岩藻吡喃糖苷(CNP-F)水解生成2-氯-对硝基酚(CNP)，在405nm或410nm波长监测CNP的生成速率，计算出AFU活性。本法测定对胆红素250mg/L、血红蛋白230mg/L、抗坏血酸6g/L无明显干扰。该法操作简便，测定时间短，灵敏度和抗干扰性有一定程度的提高，，但依然达不到理想水平，并且存在试剂盒稳定性不好，准确度不高的问题。

目前，已经报道的测定α-L-岩藻糖苷酶的试剂盒少之又少，刘建武“连续监测法测定血清α-L-岩藻糖苷酶”，《临床检验杂志》，1997年03期中记载了一种血清α-L-岩藻糖苷酶单一试剂连续监测法，所用试剂为pH6.5缓冲液，0.1mol/L柠檬酸、0.2mol/L磷酸氢二钠，1.0mmol/L对硝基酚α-L-岩藻吡喃糖苷，检测结果为20份血清的测定值经配对t检验，P0.05，差异无统计意义；同一份混合血清用本法测定，批内CV＝5.0％，批间CV＝7.4％；一份32U/L的高值血清经稀释后测定，仍呈良好的线性关系r＝0.999，胆红素115μmol/L，血红蛋白32g/L及三酸甘油300μmol/L对测定值无明显干扰，但是该试剂存在不稳定，准确度低的缺点。

因此开发一种准确度高、稳定性强的α-L-岩藻糖苷酶测定试剂盒，成为本领域研究的重中之重，本发明在实施过程中意外地发现控制试剂盒中加入一定质量比的氨基酸不仅可以提高试剂盒检测准确性以及试剂稳定性，还有效的提高了检测的精密性。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在提高试剂盒检测准确性以及试剂稳定性的前提下，进而提高检测的精密性，因此提供了一种准确度高、精密度好、稳定性强的α-L-岩藻糖苷酶测定试剂盒。

本发明解决上述技术问题提供的技术方案是：