[发明专利]一种快速建立大泷六线鱼近交系的方法

说明书

本发明涉及染色体操作技术，具体地说是一种高效快速建立大泷六线鱼近交系的方法。收集大泷六线鱼精液灭活，利用遗传灭活的精子与分离成单粒的卵进行人工授精，再通过静水压力抑制第二极体排放，而后诱导雌核发育获得大泷六线鱼近交系。采用本发明方法可高效、稳定、可靠地诱导获得100％的大泷六线鱼雌核发育鱼苗，快速建立近交系。

技术领域

本发明涉及染色体操作技术，具体地说是一种高效快速建立大泷六线鱼近交系的方法。

背景技术

大泷六线鱼(Hexagrammos otakii)，属鲉形目(Scorpaeniformes)、六线鱼科(Hexagrammidae)，为冷温性鱼类，是我国北方及日韩重要的海水增养殖鱼类。遗传育种是规避其目前累代养殖模式带来的种质退化风险的有效途径，亟待开展。常规选择育种周期长，而雌核发育技术则可以快速获得近交系，极大缩短了育种周期，因此进行大泷六线鱼的雌核发育技术的开发具有十分重要的产业价值。

雌核发育技术目前已在多种鱼类中得到开发利用，但大泷六线鱼具有特殊的精卵特征，常用的雌核发育方法不适用。大多数鱼类成熟精子处于静止状态，排出体外后在环境条件下被激活。而大泷六线鱼精子浓度较高，精液取出后不需激活便已处于高活力状态。由于雌核发育首先需要灭活精子，这一过程一般需要5-10min，甚至20min以上。对大泷六线鱼而言，若不抑制精子运动，多数精子在紫外灭活后随能量消耗活力下降，会显著影响授精效果。因此相较其它鱼类，大泷六线鱼的精子灭活需要考虑不同的方法和条件。大泷六线鱼的卵也与多数养殖鱼类不同，为粘性卵，卵粒间有大量蛋清样粘液存在，在接触海水后会迅速硬化成具弹性的卵块。目前已有报道的鲤、鲫、黑尾近红鲌等淡水鱼类以及红鳍东方鲀等海水鱼类虽然也属粘性卵，但仅卵膜具有粘性，并无粘液存在，采用常见的半干法授精，结合脱粘或将卵附着在网片上的步骤便可避免卵粘结成块。而大泷六线鱼的鱼卵特征导致常规授精方式极易产生卵块，也无从脱粘以及附着。虽有报道将大泷六线鱼受精卵平整成卵片可提高其成活率。但实际操作中，采卵过程中难以避免掺入少许海水，使得受精卵提前硬化出现团块。同时由于大泷六线鱼卵的粘性，卵片往往为多层。在雌核发育诱导过程中，多层卵块或卵片受到的处理条件不均一，影响诱导效果。雌核发育的诱导效应也会使一些鱼卵死亡，在卵片内部的死卵难以清理，极易导致周围好卵被污染死亡，降低了成活率和诱导效果。这是高效诱导大泷六线鱼雌核发育鱼苗的技术瓶颈。本发明根据大泷六线鱼的精卵特征，针对性地开发了相应的雌核发育诱导方法，可快速建立近交系。这对于大泷六线鱼良种培育及其养殖业健康可持续发展是非常必要的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速建立大泷六线鱼近交系的方法。

为实现上述目的，本发明采用技术方案为：

一种快速建立大泷六线鱼近交系的方法，收集大泷六线鱼精液灭活，利用遗传灭活的精子与分离成单粒的卵进行人工授精，再通过静水压力抑制第二极体排放，而后诱导雌核发育获得大泷六线鱼近交系。

具体为：

1)人工授精

向采集的卵中加入等体积Ringer氏液进行洗卵至获得单粒的卵；取灭活的精液与卵在避光条件下按体积比1:1-2比例充分混合，慢慢喷淋等体积海水，至卵开始互相粘附时将卵聚成1-2层的薄片，继续加入海水至受精卵卵片完全硬化后用新鲜海水冲洗，而后进行流水充气孵育；

2)染色体诱导加倍

受精后15-25min，将受精卵在55-70MPa静水压下进行休克处理，处理4-7min，而后继续流水充气孵育；

3)受精卵的孵育

在受精卵孵育期间，自5dpf(受精后第5天)开始，每1-2d，对孵育的受精卵进行清理，12-14℃条件下大泷六线鱼约22-26d破膜孵化，获得大泷六线鱼近交系。

上述充气孵育过程中保持溶解氧DO为6.5-7.5mg/L。