[发明专利]GBM-7S(α1)-NC1(α3)融合蛋白及其制备方法

说明书

本发明涉及抗原制备领域，具体而言，提供了一种GBM‑7S(α1)‑NC1(α3)融合蛋白及其制备方法。本发明提供氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的GBM‑7S(α1)‑NC1(α3)融合蛋白。该融合蛋白的抗原性好，可以有效被人GBM抗体识别反应。本发明提供的GBM‑7S(α1)‑NC1(α3)融合蛋白的制备方法，将载体与本发明提供的核苷酸片段构建的重组载体，转染昆虫细胞后进行蛋白表达，得到GBM‑7S(α1)‑NC1(α3)融合蛋白。该方法使得利用昆虫细胞即可大量稳定地表达得到抗原性好的GBM抗原，该方法简单易操作，整个流程中得到的生物模块均可独立保藏和应用。

技术领域

本发明涉及抗原制备领域，具体而言，涉及一种GBM-7S(α1)-NC1(α3)融合蛋白及其制备方法。

背景技术

球状基底膜蛋白(glomerular basement membranes，GBM)是抗GBM抗体的靶抗原，其主要抗原位点位于肾小球基底膜的Ⅳ型蛋白α3链(Collagen alpha-3(IV)chain，下称COL4α3)中的NC1结构域。获取天然的GBM蛋白需要从肾脏中提取，提取的难度很高且产量较低，因此重组GBM蛋白的表达很有价值。

人的球状基底膜(GBM)Ⅳ型蛋白主要由6个亚型，分别为：α1、α2、α3、α4、α5和α6六种亚型。其主要抗原位点位于α3亚型中的NC1结构域。GBM蛋白主要由N端的7s结构域、C端的NC1结构域和位于两者之间的三重螺旋结构域，其中NC1结构域是主要的抗原位点。现有技术中用大肠杆菌表达的GBM蛋白的NC1结构域(下称GBM-NC1)溶解性较差且不能被人GBM抗体识别反应；在昆虫细胞中单独表达GBM-NC1结构域，蛋白亦不表达。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种GBM-7S(α1)-NC1(α3)融合蛋白，以缓解现有技术中GBM抗原抗原性差从而急需新抗原的问题。

本发明的第二目的在于提供一种编码上述GBM-7S(α1)-NC1(α3)融合蛋白的核苷酸片段，含有该核苷酸片段的重组载体或细胞系，这些生物模块均可稳定保存GBM-7S(α1)-NC1(α3)融合蛋白的序列，随时快速得到GBM-7S(α1)-NC1(α3)融合蛋白。

本发明的第三目的在于提供上述GBM-7S(α1)-NC1(α3)融合蛋白及相关生物模块在制备抗GBM抗体中的应用，以及制备得到的抗GBM抗体。

本发明的第四目的在于提供上述GBM-7S(α1)-NC1(α3)融合蛋白的制备方法，以缓解现有技术中在昆虫细胞表达体系中无法制备GBM抗原的问题。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种GBM-7S(α1)-NC1(α3)融合蛋白，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

编码上述所述GBM-7S(α1)-NC1(α3)融合蛋白的核苷酸片段。

进一步地，所述核苷酸片段还包括信号肽序列；

优选地，所述信号肽序列包括GP67信号肽序列，所述GP67信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；

优选地，所述核苷酸片段还包括蛋白标签；

优选地，所述蛋白标签包括6his-tag标签。

含有上述核苷酸片段的重组载体；

优选地，所述重组载体包括克隆载体或表达载体。

含有上述核苷酸片段的细胞系；

优选地，所述细胞系包括昆虫细胞，进一步优选为sf9细胞或High Five细胞。