[发明专利]一种用于检测金黄色葡萄球菌的引物组合和试剂盒

说明书

本发明提供了一种用于检测金黄色葡萄球菌的引物组合和试剂盒，属于生物检测技术领域，引物组合包括内部引物组和外部引物组；内部引物组包括上游内部引物和下游内部引物，上游内部引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3、7、12或17所示，下游内部引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4、8、13或18所述；外部引物组包括上游外部引物和下游外部引物，上游外部引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1、5、10或15所示，下游外部引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2、6、11或16所示。本发明的引物组合对金黄色葡萄球菌具有高度的特异性，结合等温扩增方法能够缩短检测的时间，仅需45min就能够得出检测结果。

技术领域

本发明属于生物技术检测技术领域，尤其涉及一种用于检测金黄色葡萄球菌的引物组合和试剂盒。

背景技术

金黄色葡萄球菌是一种非常重要的致病微生物，隶属于葡萄球菌属，是一种革兰氏阳性菌，能够引起非常严重的感染，更甚者则可能导致死亡。金黄色葡萄球菌可通过多种媒介传播，既可通过空气传播，又可以通过水、食物等方式传播，因而可以导致多种方式的感染。此外，金黄色葡萄球菌产生了多种突变体，可对多种抗生素(例如甲氧西林和万古霉素)产生抗药性，因此其传播不易被控制。目前，对金黄色葡萄球菌的检测方法主要采用的是培养法，通常需要48-72小时的培养，能够判定样本中是否含有金黄色葡萄球菌。感染性疾病是近年来临床常见的疾病之一，上感染、肺炎等疾病若不能作出及时诊断并及时用药，极易危及生命。目前对金黄色葡萄球菌的检测远不能达到时效需求，因此，对其快速、准确地检测具有非常重要的意义。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种用于检测金黄色葡萄球菌的引物组合和试剂盒，本发明提供的引物组合对金黄色葡萄球菌具有高度的特异性，结合等温扩增方法能够缩短检测的时间。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种用于检测金黄色葡萄球菌的引物组合，所述引物组合包括内部引物组和外部引物组；

所述内部引物组包括上游内部引物和下游内部引物，所述上游内部引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3、7、12或17所示，所述下游内部引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4、8、13或18所示；

所述外部引物组包括上游外部引物和下游外部引物，所述上游外部引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1、5、10或15所示，所述下游外部引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2、6、11或16所示。

优选的，所述引物组合还包括环引物，所述环引物包括上游环引物和下游环引物，所述上游环引物的核苷酸序列如SEQ ID No.9或19所示，所述下游环引物的核苷酸序列如SEQ ID No.14或20所示。

本发明还提供了一种试剂盒，包括上述技术方案所述的引物组合、核酸扩增反应酶、核酸扩增缓冲液和扩增显色剂。

优选的，所述核酸扩增反应酶包括Bst DNA聚合酶。

优选的，所述Bst DNA聚合酶的酶活为5U～15U。

优选的，所述核酸扩增缓冲液包括20mM Tris-HCl、10mM(NH₄)₂SO₄、50mM KCl、24mMMgSO₄、0.1％Tween 20、1mM dNTP，所述核酸扩增缓冲液的pH值为8.8。

优选的，所述扩增显色剂包括SYBR Green I。

优选的，还包括阳性对照、阴性对照和芯片。

优选的，所述阳性对照包括感染金黄色葡萄球菌的阳性质粒。

优选的，所述阴性对照包括无核糖核酸酶和/或无脱氧核糖核酸酶的去离子水。