[发明专利]一种促使多粘类芽孢杆菌产芽孢的发酵方法

说明书

本发明属于生物技术和生物工程领域，具体涉及一种促使多粘类芽孢杆菌产芽孢的发酵方法。包括以下步骤：将多粘类芽孢杆菌在活化培养基进行活化；将多粘类芽孢杆菌接种至种子培养基进行种子培养；再将种子培养液接种至发酵培养液发酵培养，依次经过一级升温并调节pH值继续培养；二级升温并调节pH值继续培养；发酵结束时，调节pH，即可；本发明能够缩短多粘类芽孢杆菌发酵过程中的芽孢出芽时间及提高芽孢数量和出芽率，出芽孢率达91.4%以上，有利于减低生产成本和提高产品质量。

技术领域

本发明属于生物技术和生物工程领域，具体涉及一种促使多粘类芽孢杆菌产芽孢的发酵方法。

背景技术

能源植物--菊芋是一种多年生草本植物，俗称洋姜、鬼子姜，具有耐盐碱、产量大等优点。菊芋中含有菊粉（又称菊糖），系多聚果糖，可占湿重的15~20%、干重的80%左右，滩涂荒地生物量可达3~6吨/亩。一些多粘类芽孢杆菌自身产菌粉酶，能够利用菊粉作为发酵碳源。

多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa，前称Bacillus polymyxa）对人或动植物无致病性，是一类生活在植物根际土壤或附生于植物根部的可直接或间接促进植物生长、生防作用和增强植物对逆境胁迫抵抗力的微生物，在生物农药和肥料研制和生产过程中具有重要价值。近年来最新研究成果日新月异、层出不穷，对其理解和认知也趋于系统化。由于其诱人的应用前景，美国环保署(EPA)将它列为可商业上应用的微生物之一，我国农业部也将其列为免做安全鉴定的一级菌种。

已有报道利用多粘类芽孢杆菌HY96-2菌株创制微生物农药（0.1亿CFU/g细粒剂，商品名：康地蕾得）的报道，但是由于所用固态菌剂成本高，菌株数量低，使用效果欠佳等因素，近来来，市场上鲜有该产品。研究开发多粘类芽孢杆菌液体芽孢型生物肥料菌剂，可以避免上述缺陷，并能增加菌肥在土壤中活菌的数量和使用效果，且生产成本低廉，一举多得。而提高上述菌肥中多粘类芽孢杆菌芽孢数量是产品开发的关键技术之一，并将有利于产品的运输和长期储存。

发明内容

针对现有技术存在的芽孢形成时间长、出芽率低以及芽孢数量不高等问题，本发明提供一种促使多粘类芽孢杆菌产芽孢的发酵方法，本发明能够缩短多粘类芽孢杆菌发酵过程中的芽孢出芽时间及提高芽孢数量和出芽率。

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：

一种促使多粘类芽孢杆菌产芽孢的发酵方法，包括以下步骤：

（1）将多粘类芽孢杆菌在活化培养基进行活化；

（2）将多粘类芽孢杆菌接种至种子培养基进行种子培养；

（3）再将种子培养液接种至发酵培养液发酵培养，依次经过一级升温并调节pH值继续培养；二级升温并调节pH值继续培养；发酵结束时，调节pH，即可；

所述的发酵培养提高活菌数量培养条件为：30℃，120 rpm，pH7.0，24 h；

所述的一级升温并调节pH值继续培养条件为：40-44℃，120 rpm，pH7.5-8.0，12h；

所述的二级升温并调节pH值继续培养条件为：45-50℃，120 rpm，pH8.0-8.5，12h。

优选地，所述步骤（1）中活化条件为30℃，活化培养基包括以下组分：(NH₄)HPO₄1.0g/L，KCl 0.20g/L，MgSO₄.7H₂O 0.20g/L，酵母膏 2.0g/L，葡萄糖 5.0g/L，琼脂 20.0g/L，且pH 7.0，培养48 h。