[发明专利]一种硫酸阿贝卡星及其杂质的检测方法

说明书

本发明涉及硫酸阿贝卡星，特别涉及硫酸阿贝卡星及其杂质的检测方法。本发明通过优化获得检测硫酸阿贝卡星及其杂质的方法。首次建立了用于硫酸阿贝卡星含量和有关物质测定HPLC‑PAD法，与日本药典收载方法相比，专属性好，方法耐用。

技术领域

本发明涉及硫酸阿贝卡星，特别涉及硫酸阿贝卡星及其杂质的检测方法。

背景技术

硫酸阿贝卡星(Arbekacin Sulfate，ABK)系日本微生物化学研究所梅泽派夫等发现，日本明治制果制药公司开发的氨基糖苷类抗生素，于1990年投放市场。阿贝卡星抗菌机理为抑制细菌蛋白质的合成。阿贝卡星与地贝卡星相似，对各种钝化酶稳定，结构上可形成对钝化酶的立体屏障，对氨基糖苷类灭活酶有高度拮抗力。该类药物对临床症状的改善与用量成正比，呈剂量依赖，且具有抗生素中最强的抗生素后效应(PAE)，至今在临床上仍受重视。

氨基糖苷类抗生素的结构中含有多个羟基和氨基，它们是许多钝化酶的作用靶点。因此，删除其中与抗菌活性无关的羟基或保护个别的氨基就可以避免这些钝化酶的攻击，从而增强对耐药菌的抗菌活力。据此，日本的梅泽等人对卡那霉素B进行了结构改造，删除掉卡那霉素中3'和4'位的羟基，得到地贝卡星(Dibekacin，DKB)，其化学名称：3'，4'-二脱氧卡那霉素B，地贝卡星保持了卡那霉素B的抗菌活性，在抵制钝化酶攻击方面明显强于卡那霉素B。梅泽等人接着在地贝卡星的C-I氨基上引入a羟基Y氨基丁酸侧链，得到阿贝卡星，其化学名称：1-N-(L-4-氨基-2-羟基丁酰)-3'，4'-二脱氧卡那霉素B。阿贝卡星的耐酶性更好，其耳肾毒性均比母核低。

文献报道的阿贝卡星合成方法如下：以卡那霉素B为初始原料，经过叔丁氧羰基保护卡那霉素B的五个氨基，羟醛缩合保护4″与6″位的羟基，接着在2,4,5-三碘咪唑、三苯基膦及咪唑存在下，消除3′与4′位羟基形成双键，再在盐酸的甲醇溶液中脱除氨基及羟基保护，催化加氢得到地贝卡星；以地贝卡星为原料，经过三甲基硅基保护所有的氨基和羟基，接着用合成得到的活性酯对1位氨基进行酰化，依次用盐酸和水合肼脱除保护基，最后催化加氢得到阿贝卡星。硫酸阿贝卡星原料中的有关物质包括起始原料、中间体、副产物、降解产物以及合成原料中杂质等，部分已知杂质有半合成原料地贝卡星，原料中的杂质卡那霉素B和阿贝卡星异构体。这些有关物质和杂质都有可能存在阿贝卡星原料药及制剂中影响产品质量。因此有必要建立灵敏、准确的分析方法对硫酸阿贝卡星进行质量控制。

JP16(2011年版)收载了硫酸阿贝卡星原料、硫酸阿贝卡星注射液；中国、美国、欧洲、英国药典均未收载硫酸阿贝卡星原料及制剂。JP16对硫酸阿贝卡星原料及制剂用抗生素微生物检定法对含量进行了控制，采用衍生化HPLC-荧光检测法控制组分地贝卡星和有关物质的量。该方法灵敏度低，不能有效检出阿贝卡星原料及制剂中的各种杂质。检验方法的有效性和科学性，应当是既能对药品作出合格与不合格的判定，又能对样品质量作出评价，从更高、更深层次掌握药品的质量问题。现行检验方法在控制和评价药品质量方面还存在一些问题，含量测定时可控性不太好，不能有效测定有关物质的质量，可对含量和有关物质检查项的检验方法进一步完善。

发明内容

发明目的

本发明针对现有技术中存在的不能有效检测出阿贝卡星原料和制剂中的各种杂质，如杂质有半合成原料地贝卡星，原料中的杂质卡那霉素B和阿贝卡星异构体，提出一种新的检测方法。

技术内容

为了使硫酸阿贝卡星的质量评价更具系统性和科学性，参照国内外文献及药典对硫酸阿贝卡星有关物质及含量测定方法，本发明在方法学验证的基础上，建立了HPLC-PAD法测定硫酸阿贝卡星的有关物质。结果显示，HPLC-PAD法检测的杂质总量较多，而且可以直观的归属各杂质的来源。本发明对流动相组成和含量进行了优化，使硫酸阿贝卡星各组分得到了很好的分离。实验证明，该方法为一种不需要衍生化、灵敏的直接检测方法。

技术方案