[发明专利]一种预防雏鹅痛风的鹅星状病毒二价灭活疫苗

说明书

本发明提供一种鹅星状病毒二价灭活疫苗，包含有灭活的两种病毒株抗原和疫苗佐剂，其中抗原为新型鹅星状病毒GD株和保藏编号为CCTCC NO:V201976的鹅星状病毒变异毒SC‑3株。本发明所提供的二价灭活疫苗能够对当前我国流行的雏鹅痛风病起到很好的预防作用，从而减少养殖业的损失。

技术领域

本发明属于禽类疫苗制备技术领域，具体涉及一种预防雏鹅痛风的鹅星状病毒二价灭活疫苗。

背景技术

自2015年以来，我国广大养鹅地区出现了一种以痛风为主要特点的传染性疾病，该病主要发生于5-15日龄雏鹅，造成20％～30％的死亡率，饲养条件差的高达40％，发病日龄越小，死亡率越高，15日龄以后基本无死亡，死亡雏鹅主要表现为全身各脏器和关节的严重尿酸盐沉积，耐过鹅往往由于消化吸收障碍导致饲料转化率低下，机体发育不良，大群生长参差不齐，严重影响鹅群生产成绩，给我国的养鹅业造成了重大损失。

经病原分离与鉴定确诊了雏鹅痛风主要是由两种基因型的鹅星状病毒所引起。目前，我国没有针对鹅星状病毒的疫苗，因此，筛选鹅星状病毒并制备疫苗对于雏鹅痛风病的防控具有重大意义。

发明内容

本发明提供一种鹅星状病毒二价灭活疫苗，从而填补我国没有鹅星状病毒疫苗的空白。

本发明提供一种鹅星状病毒二价灭活疫苗，包含有灭活的两种病毒株抗原和疫苗佐剂，其中抗原为鹅星状病毒GD株(鹅星状病毒，购自中国兽医药品监察所)和保藏编号为CCTCC NO:V201976的鹅星状病毒FLX变异毒SC-3株；

其中这两种病毒株的病毒含量不低于2×10^6.0TCID₅₀/0.1ml；

其中病毒株是使用甲醛溶液进行灭活。

所述的疫苗佐剂为油相佐剂，其一种组成是94份兽用白油，1份硬脂酸铝、5份司本-80。

本发明的二价灭活疫苗，其制备方法如下：

1)病毒增殖及收获：将GD株在LMH细胞上进行病毒增殖，将SC-3株在鹅胚绒毛尿囊膜上进行病毒繁殖，获得病毒液；

2)病毒的浓缩：将收获的2种病毒液在2～8℃条件下，用超滤浓缩机浓缩2倍，浓缩的病毒液准备进行灭活；

3)病毒灭活：将浓缩的病毒液导入灭活罐内，计量加入10％甲醛溶液，充分混合，甲醛溶液的最终浓度为0.1％；37℃摇床内，200rpm震荡灭活20小时后取出，放2～8℃保存；

4)油相制备：取兽用白油95份，硬脂酸铝1份，置于油相制备罐中加热至80℃后，再加司本－80 5份，至温度达到115℃时，维持30min，冷却后备用；

5)水相制备将步骤3)灭活的鹅星状病毒GD株和SC-3株抗原液各96份分别与灭菌后的4份吐温-80混合，在水相制备罐中搅拌至吐温-80完全溶解；

6)乳化：取油相2份放于高速剪切机内，开动电机慢速转动搅拌，同时徐徐加入水相1份，以10000r/min进行乳化制成疫苗。

本发明所提供的二价灭活疫苗能够对当前我国流行的雏鹅痛风病起到很好的预防作用，从而减少养殖业的损失。

附图说明

图1：不同方式攻毒后的解剖图；

图2：不同攻毒组鹅只的泄殖腔拭子病毒基因RT-PCR检测图，每组随机抽样检测了11只，M泳道：Marker，“N”代表阴性对照；

图3：不同免疫组攻毒后鹅泄殖腔拭子病毒基因RT-PCR检测图，其中1-20泳道分别代表鹅只编号，阳性目的条带切胶后测序鉴定均为鹅星状病毒序列；M泳道：Marker；攻毒后第2、4、6、8、10、12天的排毒情况与攻毒后第14天一致；