[发明专利]6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体及其在制备庆大霉素检测试剂中的用途有效

专利信息
申请号: 202010009771.2 申请日: 2020-01-06
公开(公告)号: CN111504921B 公开(公告)日: 2023-04-18
发明(设计)人: 张永侠;封建新;张启飞;龚俊;王贵利;刘希 申请(专利权)人: 北京九强生物技术股份有限公司
主分类号: G01N21/31 分类号: G01N21/31;G01N35/00
代理公司: 北京戈程知识产权代理有限公司 11314 代理人: 程伟;程云
地址: 100083 北京市*** 国省代码: 北京;11
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摘要:
搜索关键词: 磷酸 葡萄糖 脱氢酶 突变体 及其 制备 庆大霉素 检测 试剂 中的 用途
【说明书】:

本申请涉及6‑磷酸葡萄糖脱氢酶突变体及其在制备庆大霉素检测试剂中的用途。具体而言,本申请的6‑磷酸葡萄糖脱氢酶突变体相较于野生型6‑磷酸葡萄糖脱氢酶包含选自以下的一个突变或其组合:D306C、D375C、G426C。使用本申请的6‑磷酸葡萄糖脱氢酶突变体所制备的庆大霉素检测试剂盒,其特异性强、灵敏度高、操作方便、检测时间短、批间差小,具有良好的应用前景。

本申请要求2019年1月9日提交的申请号为201910017764.4和2019年5月21日提交的申请号为201910423122.4《6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体及其在制备检测试剂中的用途》的优先权,其通过引用并入此处。

技术领域

本申请涉及生物检测领域,特别是涉及一种突变的酶6-磷酸葡萄糖脱氢酶(简称G6PDH)及其在庆大霉素检测试剂盒中的应用。

背景技术

半抗原,某些小分子物质(分子量小于4000Da),其单独不能诱导免疫应答,即不具备免疫原性,但当其与大分子蛋白质或非抗原性的多聚赖氨酸等载体交联或结合后可获得免疫原性,诱导免疫应答。这些小分子物质可与应答效应产物结合,具备抗原性,它只有免疫反应性,不具免疫原性,又称不完全抗原。

半抗原能与对应抗体结合出现抗原-抗体反应,又不能单独激发人或动物体产生抗体的抗原。它只有免疫反应性,不具免疫原性,又称不完全抗原。大多数多糖、类脂、激素、小分子药物都属于半抗原。如果用化学方法把半抗原与某种蛋白分子(载体)结合,会获得新的免疫原性,并能刺激动物产生相应的抗体。半抗原一旦与蛋白结合,就构成该蛋白质的一个抗原簇。一些比一般半抗原分子量小,但有特异结构的化学活性基团物质(如青霉素、磺胺剂等),称为简单半抗原。

小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点,因此不能用双抗体夹心法进行测定,多采用竞争模式。原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。标本中抗原量含量愈多,结合在固相上的酶标抗原愈少,显色愈浅。小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。

庆大霉素(Gentamicin)是三种化合物的混合物,三种化合物结构如下所示:

庆大霉素最早是由Weinstein于1963年发现的,它是小单孢菌产生的多组分的氨基糖苷类抗生素,包括C1、C2、C1a、C2a和C2b等组分。庆大霉素主要组分C1、C2和C1a在临床上被广泛使用,其中抗菌活性最高的是C1a,它是合成依替米星的前体,其次是C2b,又称之为沙加霉素。此类抗生素能够与细菌核糖体30S亚基上的16S rRNA结合,引起遗传密码的误读,从而阻断细菌蛋白质的合成,所以主要用于治疗细菌感染,尤其是革兰阴性菌引起的感染。

庆大霉素是一种氨基糖苷类药,作用于细菌体内的核糖体,抑制细菌蛋白质合成,并破坏细菌细胞膜的完整性。肌内注射庆大霉素后吸收迅速而完全。局部冲洗或局部外用后也可经身体表面吸收一定药量。经眼给药极少吸收进入眼内组织或进入全身血液循环。口服后吸收很少。肌内注射或静脉滴注后,30-60分钟血药浓度达峰值,平均血药浓度峰值约为4μg/ml。庆大霉素的蛋白结合率很低,药物吸收后主要分布于细胞外液。成人半衰期为2-3小时,发热、贫血、严重烧伤患者或合用羧苄青霉素患者半衰期可缩短。庆大霉素在体内不代谢,主要经肾小球滤过随尿液排出。

目前已知的庆大霉素检测方法主要有:酶联免疫吸附法、化学发光免疫分析法、高效液相色谱法、气液色谱法、气相色谱法和质谱联用等。但这些检测方法均存在较多的缺陷,如化学发光尽管灵敏度较好,但需要配套的专用设备,投入使用成本较高不利于推广。在临床检测诊断过程中,以均相酶免疫法(EMIT)和胶乳增强免疫比浊法检测为主。

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